• [بكر]
• علمت حول [بكر]
• أنواع ال [بكر]
• [بكر] خطوات
• [بكر] أخبار
• [بكر] يتحرّى
• [بكر] مشكلة
• [بكر] كتب
• [بكر] ساحة
• علم الأحياء [رسوسس]
• قلت صديقة
• [بووكمرك] نا!
• أعلنت على [بكر] محطّة!

[بكر] أنزيم: [بكر] [بولمرس]

[بكر] [بولمرس] - المراد نهائيّة

حقّ نشر 2006 [بكر] محطّة

[بكر] [بولمرس]: تقليم

 

حدّدت الإختبار من ال [دنا] [بولمرس] يستخدم ب [بكر] بالأهداف من التجربة. هناك الآن وفرة من أنزيم [كمّرسلّ-فيلبل] أن يختار من أنّ يختلف في هم [ثرمل ستبيليتي], [بروسسّيفيتي], وحالة إخلاص. ال أكثر [كمّونلي وسد] وأكثر بشكل واسع يدرس أنزيم [تق] [دنا] [بولمرس].

أوّليّة [بكر] [بولمرس]

ال [دنا] استخرجت [بولمرس] يستعمل أصلا في الأولى [بكر] ردّ فعل كان من الجرثوم [إسكهريشا كلي]. رغم أنّ هذا أنزيم كان أداة نفيس ل كثير جزيئيّ علم الأحياء بحث إستعمالات في السابقة ويتساوى اليوم, تلقّى هو كثير سيئة في ال [بكر] أصليّة. في [بكر], ال [بكر] ردّ فعل ينبغي كنت شوّهت ب يسخّن ال [دووبل-سترندد] [دنا] منتوج بعد كلّ دولة. أخمد لسوء الحظّ, يسخّن أيضا نهائيّا ال [إ.] [كلي] [دنا] [بولمرس]. [أليقووتس] طازجة أنزيم اضطرّ كنت أضفت يدويّا في البداية من كلّ دولة. مع 30-40 دول ال [بكر], كان هذا جدّا شاقّ ومهمة مملّة.

ماذا كان تطلّبت كان [دنا] [بولمرس] أنّ يبقى ثابت أثناء ال [دنا] مسخ خطوة ينجز في [90ك] أو [هوتّر]. إكتشاف جعل الحلّ كثير يتيح. الجرثوم عزلت [أقوتيكس] [ثرموفيلوس] كان من ماء نابض حارّ. كان هذا جرثوم يمكن يبقى ويتكاثر في ال جدّا [هي وتر] درجة حرارة من النابض حارّ. أنتج عمليّة عزل من ال [دنا] [بولمرس] من هذا جرثوم [بكر] [بولمرس] أنّ كان لم بسرعة أخمدت في [هي تمبرتثر]. [جلفند] [إت ل]. في قيطس صفّى مؤسّسة بنجاح واستنسخ هذا [بكر] [بولمرس] الآن يدعى [تق] ([ثرموفيلوس] [أقوتيكس] في قصيرة) [بولمرس].

هذا سمح 30-40 دول من [بكر] تضخيم أن يكون أنجزت دون الحاجة أن يفتح ال [بكر] ردّ فعل أنابيب وأضفت [بولمرس] طازجة. هذا أيضا يقع يقلّد تلوث ممكنة أنّ استطاع كنت قدّمت عندما يضيف [بولمرس] يدويّا على 20-30 في الأصليّة [بكر] ردّ فعل. عمل أيضا, واجبة إلى الطبيعة من الجرثوم محبّ للحرارة وال [بولمرس], [تق] [أبتيملّي] في درجة حرارة حول [72ك], يسمح [دنا] تأليف أن يكون أنجزت في كثير [هيغر]
كان درجة حرارة من يمكن مع ال [إ.] [كلي] أنزيم. هذا تلقّى الميزة من يسمح الطبعة [دنا] طاق أن يكون نسخت في كثير حالة إخلاص [هيغر] واجبة إلى [ستريجنسي] [هيغر] من [بكر] كبسولة تفجير [أنّلينغ]. هذا بعيدة يقلّد منتوج [نون-سبسفيك] أيّ كان قد أثر كثير مبتكرة [بكر] ردّ فعل.

 

[تق] [دنا] [بولمرس]

[تق] [بولمرس] أيضا ببساطة يدعى "[تق]", ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس] يستعمل في [بولمرس] [شين ركأيشن] ([بكر]) أن يحفز ال [دنا] جوابة ردّ فعل في ال [بكر] دولة. في هذا طريقة التضخيم, [بكر] يمكن أن يفحص للوجود أو غياب من مورث الفائدة في عينة أحيائيّة.

نموذج جزيئيّ من [تق] [دنا] [بولمرس]. يبدي [كرستل ستروكتثر] من [تق] [دن-بولمرس] توجيه جديدة ل ال [ستروكتثر-سبسفيك] [نوكلس] مجال.

[تق] [دنا] استبدل [بولمرس] [إ.كلي] [دنا] [بولمرس] في [بكر], واجبة إلى خاصيته ثابت بالحرارة. عزلت [تق] كان أولى من [ثرموس] [أقوتيكس], جرثوم أنّ يعيش في نابض حارّ ومنفس حراريّ مائيّ.

[تق] كان ال [بولمرس] أولى أنّ كان يمكن أن يقاوم ال يشوّه شرط (على 90 [ك]) يتطلّب أثناء [بكر] ينهي.

[تق] يتلقّى [إ] [هلفليف] [نزمتيك] في [95ك] من حوالي 40 [مين.]. رأيت ل كثير خاصية [تق], الطاولة أدناه.

واحدة من [تق] [بولمرس] سيئة كبريات ه منخفضة جوابة حالة إخلاص. بما أنّ [تق] لا يتلقّى 3 ' إلى 5 ' [إإكسونوكلس] ينقّح آلية أن يستبدل حالة عدم توافق عرضيّة في ال حديثا يصطنع [دنا] طاق, ينتج [تق] كثير أخطاء من ينقّح [بولمرس] مثل [بفو].

[تق] [دنا] [بولمرس] أيضا فريدة داخل أنّ ينتج هو [بكر] منتوج مع [ا] ([أدنين]) نتوءات. أسّست هذا كان أن يكون الى حدّ بعيد مفيد, وكان استغلّت أن ينتج [تا] استنساخ و [توبو] استنساخ ([إينفيتروجن]). يستخدم هذا طريقة استنساخ متّجه (أو [بلسميد]) أيّ يملك [ت] ([ثمين]) نتوءات. هذا يسمح عمليّة ربط يستعمل [توبويسمرس] أو [دنا] أنزيم رابط أن سريعا كنت أنجزت مع ال [ا] نتوءات من ال [بكر] منتوج

 

[بفو] [دنا] [بولمرس]

[بفو] [دنا] [بولمرس] أنزيم يؤسّس في المفرط انجذاب للحرارة [أرشيون] [بروككّوس] [فوريوسوس], حيث هو يعمل [إين-فيفو] أن يكرّر الكائن حيّ [دنا]. [إين فيترو], استعملت [بفو] أن سريعا ضخّم [دنا] في ال [بولمرس] [شين ركأيشن], حيث الأنزيم يخدم ال [سنترل فونكأيشن] من ينسخ طاق جديدة [دنا] أثناء كلّ إمتداد خطوة.

تفوّق من [بفو] [بولمرس] الفرق رئيسيّة بين [بفو] وأنزيم بديلة [بفو] ثبات حراريّ متفوّق و" ينقّح" خاصية يقارن إلى أخرى [بولمرس] ثابت بالحرارة. بخلاف [تق] [دنا] [بولمرس], [بفو] [دنا] يملك [بولمرس] 3 ' إلى 5 ' [إإكسونوكلس] ينقّح نشاط, يعني أنّ هو يعمل طريقه على طول ال [دنا] من ال 3 ' نهاية إلى ال 5 ' نهاية ويصحّ [نوكليوتيد-ميسنكربورأيشن] أخطاء. هذا يعني أنّ [بفو] [دنا] [بولمرس-جنرتد] [بكر] سيتلقّى [فرغمنتس] قليل من أخطاء من [تق-جنرتد] [بكر] ملحقة. [أس ا رسولت], استعملت [بفو] [مور كمّونلي] لاستنساخ جزيئيّ من [بكر] [فرغمنتس] من [تق] شعبيّة تاريخيّا. ينتج [بفو] [كمّرسلّ-فيلبل] بشكل خاصّ في [إرّور رت] من 1 في 1.3 مليون أزواج حقيرة ويستطيع أنتجت 2.6% منتوج [موتتد] عندما ضخّم [1كب] يفتّش يستعمل [بكر]. مهما, [بفو] بطيئة وبشكل خاصّ يتطلّب 1-2 دقائق أن ضخّم [1كب] من [دنا] في 72° [ك.]. ينتج يستعمل [بفو] [دنا] [بولمرس] في [بكر] ردّ فعل أيضا في [بلونت-ندد] [بكر] منتوج. [بفو] [دنا] [بولمرس] بالتّالي أفضل لتقنيات أنّ يتطلّب [هيغ-فيدليتي] [دنا] تأليف, غير أنّ يستطيع أيضا كنت استعملت [إين كنجونكأيشن ويث] [تق] [بولمرس] أن ينال الحالة إخلاص [بفو] مع السرعة من [تق] [بولمرس] نشاط.

تاريخ

عوادم صحبوا مع ال [بيوتش] شركة [سترتجن], يؤسّس في لاخولا, كاليفورنيا اكتشف التفوّق [بفو] على [تق] في 1991. هم نشروا عملهم في الجريدة مورث في ديسمبر - كانون الأوّل من أنّ سنة (مورث. 1991 [دك] 12; 108 (1): 1-6). [أو.س.] منحت براءة اختراع 5,489,523 كان على [بفو] [إإكسونوكلس-دفيسنت] في فبراير - شباط 1996 بينما [أو.س.] براءة اختراع 5,545,552 على [بفو] بنفسي كان منحت في أغسطس - آب 1996.

[بكر] [بولمرس]

خلاصة من يتوفّر [بكر] [بولمرس] وخاصيتهم.

[دنا] [بولمرس]	مصدر أحيائيّة	5 '--3 ' [إإكسونوكلس] نشاط	3 '--5 ' [إإكسونوكلس] نشاط	[95ك] [هلف-ليف] ([مين])	[كمّرسل نم]	يزوّد شركات	إمتداد معدلة ([نوكليوسدس/س])	[إرّور رت]	وقت [(س)] إلى [1كب] ([72ك])
[تق]	[ثرموس] [أقوتيكس]	+	-	40	[أمبليتق], [أمبليتق] نوع ذهب	[برومغ], [روش], [إينفيتروجن] وكثير أخرى.	75	1 في 10^3	32
[بفو]	[بروككّوس] [فوريوسوس]	-	+	120	[بفوتثربو]	[سترتجن], [فرمنتس], [إينفيتروجن] بين أخرى	60	1 في 1.3 [إكس] 10^6	60-120
[بوو]	[بروككّوس] [ووسي]	-	+	[ن/ا]			[ن/ا]	[ن/ا]	[ن/ا]
[تفل]	[ثرمس] [فلفوس]	-	-
[رتّه]	[ثموس] [ثرموفيلوس]	+	-	20
[تلي]	[ثرموس] [ليتوريس]	-	+	400	منفس
[تما]	[ثرموتوغ] [مريتيما]	-	+	>50

 

[بكر] و [بولمرس]

أنجزت [بكر] يتلقّى يكون على [دنا] كبيرة من 10 [كيلوبس], ولكن ال [بكر] معدّلة فقط [سفرل هوندرد] إلى [ا فو] ألف أساس ال [دنا]. المشكلة مع [بكر] طويلة أنّ هناك ميزان بين دقة و [بروسسّيفيتي] من الأنزيم. عادة, الطويلة الجزء, العظيمة الاحتمال الأخطاء.

 

[بكر] [بولمرس] مرجع

1.

2.

3.

 

 

حقّ نشر 2006 [بكر] محطّة