PCR Correção de problemas
PCR Problemas e Soluções, PCR Ajuda
What é seu PCR problema?:
Longa Não- específica PCR produtos?
Problema:
longa Não- Específica Produtos em PCR
Quando correndo um agarose gel you mancha maior não- específica PCR bandos que não estão a direita tamanho.
Soluções sentir saudade Não- específica Produtos em PCR:
Decrescimento recozimento tempo
Decrescimento extensão tempo
Decrescimento extensão temperatura a 62-68º Celsus
Incremento KCl ( memória temporária) concentração a 1.2x-2x, mas manter MgCl2 concentração at 1.5-2mM
Incremento MgCl2 concentração até 3-4.5 mM mas manter dNTP concentração constante.
Uso menos abecedário
Presa menos DNA modelo
Presa menos Taq polímero
Se nenhum dos acima obras: confirmar a cartilha for repetitiva sequências ( bufo alinhar a sequência com a bancos de dados) e alteração as cartilhas()
Combinação de algum/ todas acima.
Problema:
PCR Abecedário Moeda
Quando correndo um agarose gel, you mancha algum muita pequena PCR bandos. Heis o tamanho dos seus abecedário ou por volta o tamanho de ambas seu abecedário ( um e B) junto. Heis termo " abecedário moeda" e são formado pela recozimento dos seus abecedário com ela mesma ou com a outro abecedário.
Soluções a abecedário moeda em PCR:
Uso menos abecedário.
Referente a- desenho abecedário e ordem um nova grupo. Certificar você usa abecedário desenho software e confirmar for si mesma- recozimento e que as cartilhas fazer não parte um grande percentagem de complementar sequência. Confirmar abecedário cuidadosamente for homo- moeda e hetero- moeda formação com OligoAnalyzer
Conduta PCR com e sem formamide.
Titrate Mg2+ (MgCl 1.5, 2.0, 2.5 e 3.0 mM) concentração.
Incremento DNA modelo monta ( concentração).
Incremento recozimento temperatura ( tentar optimizing usando um gradação PCR máquina encontrar ótima temperatura for recozimento).
Tentar adicionando DMSO até 5%.
Tentar usando Assunto picante PCR em lugar regular Taq polímero PCR.
Combinação de algum/ todas acima.