Heißstart PCR - HotStart Polymerase-Kettenreaktion.
Heißstart PCR: Eine Einleitung
Heißstart PCR erlaubt die Hemmung der Polymerasetätigkeit während der PCR Reaktion Vorbereitung. Indem er Polymerasetätigkeit vor einen Kreislauf durchmachendem PCR begrenzt, verringert Heißstart PCR unspezifische Verstärkung und erhöht PCR Produkt-Zielergebnis.
Heißstart PCR wird allgemein durchgeführt, indem man enthaltene chemische Änderungen, Einwachsensperre Methoden und Hemmung durch einen taq-verwiesenen Antikörper verwendet.
PCR oder Polymerasekettenreaktion benutzt DNA Polymerasen, die von den hitzebeständigen organismen wie dem Taq Enzym, einer eubacterial Art I DNA Polymerase und Pfu lokalisiert wurden, eine archaeal Art B DNA Polymerase.
PCR verstärkt DNA durch mehrfache Zyklen des Schmelzens von von DNA an der Hochtemperatur, des Temperns der Zündkapseln bei einer niedrigeren Temperatur, und Polymeraseverlängerung dann erlauben bei einer Zwischentemperatur. Leider zeigen diese thermophilen DNA Polymerasen eine sehr kleine aber meßbare Polymerasetätigkeit bei der Raumtemperatur während des Zusammenbaus des Experimentes.
Diese wirkungslose DNA Polymerasetätigkeit katalysiert die Verlängerung aller möglicher getemperten Enden 3'. Nach PCR Verstärkung enthält das resultierende Produkt eine Mischung der spezifischen und unspezifischen Bänder. Außerdem vermindert das 5'-3 ' exonuclease Tätigkeit des DNA polymerasel alle freien 5 ' Enden der teilweise getemperten Nukleinsäuren und zerstört die Zündkapsel- und Schablonensubstrate der Polymerasereaktion. Dieses ergibt ein untereres Ergebnis des gewünschten pcr Produktes.
Heißstart PCR: Publikationen
Heißstart PCR mit Hitze-activatable Zündkapseln: eine Romanannäherung für verbesserten PC... bezog Artikel
Heißstart PCR mit Hitze-activatable Zündkapseln: eine Romanannäherung für verbesserte PCR Leistung.
Nukleinsäuren Res. Sept 2008 16;
Autoren: Lebedev Handels, Paul N, Yee J, Timoshchuk VA, Shum J, Miyagi K, Kellum J, Hogrefe RI, Zon G
Die Polymerasekettenreaktion (PCR) wird allgemein für Anwendungen verwendet, die ein hohes Niveau der Besonderheit und der Zuverlässigkeit, wie genetische Prüfung, klinische Diagnose, Blutsiebung, forensics und biodefense erfordern. Große Verbesserungen zur PCR Leistung sind durch den Gebrauch von Heißstartaktivierung Strategien, die darauf abzielen, DNA Polymeraseverlängerung bis die zwingenderen, höheren Temperaturen zu verhindern werden erreicht erzielt worden. Hierin stellen wir einem Roman Heißstartaktivierung Annäherung phosphotriester PCR, wo Zündkapseln ein oder zwei enthalten wärmeunbeständig, 4-oxo-1-pentyl (OXP) (PTE) Änderung Gruppen an 3'-terminal und internucleotide 3'-penultimate im Gestänge dar. Studien zeigten, daß das Vorhandensein von einer oder mehr OXP PTE Änderungen DNA Polymerase-Zündkapselverlängerung bei den niedrigeren Temperaturen hinderte, die vor PCR Verstärkung bestehen. Ausserdem wurde Ausbrütung der OXP-geänderten Zündkapseln bei erhöhten Temperaturen gefunden, um die entsprechende unveränderte phosphodiester (PDE) Zündkapsel zu produzieren, die dann ein verwendbares DNA Polymerasesubstrat war. Die OXP-geänderten Zündkapseln wurden in herkömmlichem PCR mit Endpunktabfragung, in der Einrückübertragung geprüft (RT)-PCR und in Realzeit-PCR mit SYBR Grün, das ich färbe und Taqman(R) Abfragung Prüfspitze. Als OXP-geänderte Zündkapseln wie ersetzt für unveränderte PDE Zündkapseln in PCR benutzt wurden, wurde bedeutende Verbesserung in der Besonderheit und in der Leistungsfähigkeit der Nukleinsäurezielverstärkung beobachtet.
PMID: 18796527 [ PubMed - wie vom Verleger geliefert ]