Pcr-Zündkapseln
Definition einer PCR-Zündkapsel:
Pcr-Zündkapseln sind kurze single-stranded, synthetisch synthetisierte kürzere als 50 Nukleotide der Oligonucleotides normalerweise (häufig 18-25 Nukleotide).
Anwendungen der PCR-Zündkapseln
Pcr-Zündkapseln sind, sie zum Anfang und zum Ende des DNA-Fragments des Interesses so wichtig sich ergänzen, muss welches verstärken. Zündkapseln wählen folglich die Grenzen der Region aus, durch PCR verstärkt zu werden. Während der PCR-Ausglühenschleife tempern PCR-Zündkapseln zur ergänzenden Region der DNA. DNA-Polymeraseschwergängigkeit und die 3 ' OH- vom Oligo lässt die Synthese von DNA auftreten.
Wählen der PCR-Zündkapseln
Wichtige zu betrachten Faktoren, wenn Zündkapseln gewählt werden:
- Optimales TM (Ausglühen T) ~ 50-60°C
- Oligonucleotide Gaschromatographie-Inhalt sollte zwischen 40-60% sein.
- Berechnetes TM (schmelzende Temperatur) für beide Zündkapseln, die in der Reaktion benutzt werden, sollte nicht sich unterscheiden >5°C.
- Zündkapselausglühentemperatur ist normalerweise 5°C unter dem berechneten untereren TM. Jedoch sollte sie für einzelne Bedingungen empirisch gewählt werden.
- Innere Selbst-ergänzende Haarnadeln von >4 und der Dimer >8 sollten vermieden werden.
- ' Terminus 3 ist extrem der empfindliche Fall - es darf nicht zu irgendeiner Region der anderen Zündkapsel sich ergänzen, die in der Reaktion benutzt wird und muss die korrekte Unterseite zur Verfügung stellen, die an Schablone anpaßt.
- Wenn möglich, sollten Zündkapseln beginnen und Ende mit 1-2 G oder c-Rückständen
- Zündkapseln sollten keine extendisve Sekundärstruktur oder Selbst-komplementarität haben (kann Zündkapsel-Dimer ergeben).
Pcr-Zündkapsel-Entwurf
Programme, zum Sie im PCR-Zündkapsel-Entwurf zu unterstützen:
Primer3
WebPrimer
Finden Sie sie hier - PCR-Zündkapsel-Entwurfs-Hilfsmittel.