Echtzeit-PCR
ECHTZEITPCR: Eine Einleitung
Obgleich die traditionellen Methoden der quantitativer Bestimmung von mRNA wie Nordbeflecken und in-situhybridation ziemlich gut sind, nähern sich sie nicht der Mühelosigkeit und der Geschwindigkeit von Echtzeit-PCR.
RT-PCR oder Rücktranscriptase PCR soll semiquantitatives Proben auf einem Gel und die Unempfindlichkeit des Äthidiumbromids laden müssen. So wurde Echtzeit-PCR aus der Notwendigkeit heraus, Unterschiede bezüglich des mRNA-Ausdrucks in einer einfachen und schnellen Weise quantitativ zu bestimmen entwickelt, und wegen der Notwendigkeit, von kleinen Mengen von mRNA wie denen erreichte zu verwenden durch kleine Gewebeproben, und LCM (Laser-Sicherung microdissection) lokalisierte Zellen.
Echtzeitrück-transcriptase (Funktelegrafie) PCR ist zu anderem quantitativem PCR unterschiedlich, da es die Anfangsmenge der Schablone quantitativ bestimmt, anstatt, die Menge des abschließenden verstärkten Produktes (Freeman, 1999 zu entdecken; Raeymaekers, 2000).
Echtzeit-PCR wird durch den Zeitpunkt während des Radfahrens gekennzeichnet, als Verstärkung des PCR-Produktes des Interesses zuerst eher als die Menge des PCR-Produktes des Interesses entdeckt wird, das am Endpunkt nach PCR akkumuliert wird, der viele Schleifen enthielt. Echtzeit-PCR tut dies, indem es die Menge von Fluoreszenz ausgestrahlt während der PCR-Reaktion überwacht, und dieser tritt als eine Anzeige der Menge der PCR-Verstärkung auf, die während jeder PCR-Schleife auftritt. So in den neueren Istzeit PCR-Maschinen, kann man den Fortschritt der Reaktion „in der Istzeit“ sichtlich sehen.
Echtzeit-PCR hat auch viel breiteren Dynamikwerte der Falte bis 107 (verglichen mit Falte 1000 in herkömmlichem RT-PCR). Die Dynamikwerte einer Probe stellen, wie viel die Zielkonzentration sich unterscheiden kann, und doch, noch mengenmäßig bestimmt zu werden fest. Diese breiten Dynamikwerte ergeben auch eine genauere quantitative Bestimmung.