Realzeit-PCR
REALZEITPCR : Eine Einleitung
Obgleich die traditionellen Methoden des Quantitativ bestimmens von von mRNA wie Nordbeflecken und in-situhybridation ziemlich gut sind, nähern sich sie nicht der Mühelosigkeit und der Geschwindigkeit von Realzeit-PCR.
RT-PCR oder Rücktranscriptase PCR soll semiquantitatives Proben auf einem Gel und die Unempfindlichkeit des Äthidiumbromids laden müssen. So wurde Realzeit-PCR aus der Notwendigkeit heraus, Unterschiede bezüglich des mRNA Ausdruckes in einer einfachen und schnellen Weise quantitativ zu bestimmen entwickelt, und wegen der Notwendigkeit, von etwas mRNA wie denen erreichte zu verwenden durch kleine Gewebeproben, und LCM (Laser Sicherung microdissection) lokalisierte Zellen.
Realzeitrück-transcriptase (Funktelegraphie) PCR ist zu anderem quantitativem PCR unterschiedlich, wie es die Ausgangsmenge der Schablone quantitativ bestimmt, anstatt, die Menge des abschließenden verstärkten Produktes (Freeman, 1999 zu ermitteln; Raeymaekers, 2000).
Realzeit-PCR wird durch den Punkt in der Zeit während des Radfahrens gekennzeichnet, als Verstärkung des PCR Produktes des Interesses zuerst anstatt die Menge des PCR Produktes des Interesses ermittelt wird, das am End-point nach PCR angesammelt wird, das viele Zyklen enthielt. Realzeit-PCR tut dies, indem es die Menge von Fluoreszenz ausgestrahlt während der PCR Reaktion überwacht, und dieses dient als eine Anzeige der Menge der PCR Verstärkung, die während jedes PCR Zyklus auftritt. So in den neueren Maschinen der Realzeit PCR, kann man den Fortschritt der Reaktion "in der Realzeit" sichtlich sehen.
Realzeit-PCR hat auch viel breitere Dynamikwerte bis zu 107-fold (verglichen mit 1000-fold in herkömmlichem RT-PCR). Die Dynamikwerte einer Probe stellen wieviel die Zielkonzentration verändern kann, und doch, noch quantitativ bestimmt zu werden fest. Diese breiten Dynamikwerte ergeben auch eine genauere quantitative Bestimmung.