RT-PCR
Heben Sie Übertragung-Polymerase-Kettenreaktion Auf
Rückübertragungpolymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) basiert auf der Polymerasekettenreaktion (PCR). Wichtiger basiert sie auf dem Prozeß der Rückübertragung, dem Rückseite RNS in DNA überträgt und zuerst von den retroviruses lokalisiert wurde.
Die Techniken von RT-PCR erlaubt die Anordnung von DNA (ergänzend oder von Kopie DNA) von der RNS, die die Reihenfolge von RNS (wie Kurier RNS, mRNA) in der beständigeren Form der Nukleinsäure speichert, DNA. Diese Rückübertragung von der RNS in seine Rückergänzung DNA (DNA) ist der erste Schritt eines normalerweise zweistufigen Prozesses von RT-PCR. Ausserdem indem es die RNS in DNA kopiert, kann man die DNA Reihenfolge dann verstärken, indem es die Zündkapseln verwendet, die für die DNA Reihenfolge spezifisch sind. Diese Verstärkung ist der abschließende zweite Hauptschritt des zweistufigen Prozesses von RT-PCR.
Der Prozeß von RT-PCR
Der erste Schritt von RT-PCR gekennzeichnet als die "erste Faserreaktion". In der Erstfaser Reaktion wird ergänzende DNA auch genannte DNA, von der Kurier RNS-Schablone des Interesses mit oligo Papier.lösekorotron (die Oligonucleotidepoly-dTs Tat ähnlich Zündkapseln und Bindung bis ' die polyA die 3 Reihenfolge gelegen am 3' UTR - unübersetzte Region, die in den meisten mRNAs anwesend sind), dNTPs gebildet, und eine RNS-ABHÄNGIGE DNA Polymerase, heben transcriptase, durch den Prozeß der Rückübertragung auf.
Diese Faktoren werden in einem Rücktranscriptase Puffer 1 Stunde lang an 37°C kombiniert. Nachdem Rücktranscriptase Reaktion komplett ist und die DNA synthetisiert worden ist, wird RNaseH addiert (ein RNS-Verdauungenzym) das die RNS weg vom Mischling RNS-DNA verdaut. Nach Ausbrütung mit RNaseH, wird Standard-PCR oder Polymerasekettenreaktion mit den DNA oligo Zündkapseln geleitet, die für die Reihenfolge des Interesses spezifisch sind. Dieser zweite Schritt gekennzeichnet als die "zweite Faserreaktion".
So indem sie die hitzebeständige DNA Polymerase addieren, wird aufwärts und abwärts gerichtete DNA Zündkapseln, die einzelne angeschwemmte DNA das Doppelte, das angeschwemmt wird und wird verstärkt und erlaubt die Abfragung der gleichmäßigen seltenen oder niedrigen Kopie mRNA Reihenfolgen, indem sie seine ergänzende DNA verstärken.
Anwendungen von RT-PCR
Die exponentiale Verstärkung der ergänzenden Reihenfolge von mRNA oder DIE RNS-Reihenfolgen über Rückübertragungpolymerase-Kettenreaktion lassen eine hohe Empfindlichkeit Abfragung Technik zu, in der niedrige Kopie Zahl oder weniger reichlich vorhandene RNS-Moleküle ermittelt werden können. Sie wird auch verwendet, um mRNA Reihenfolgen in Form von ergänzender DNA zu klonen und erlaubt, daß Bibliotheken von DNA (DNA Bibliotheken) hergestellt werden, die alle mRNA Reihenfolgen der Gene enthalten, die in einer Zelle ausgedrückt werden. Ausserdem erlaubt sie die Kreation des DNA Konstruierens, die von RT-PCR geklont und den Ausdruck der Gene auf den RNS- und Proteinniveaus für weitere Studie erlauben wurden.