Pcr αποικιών
Τι είναι pcr αποικιών;
Ο καθορισμός pcr αποικιών είναι:
Pcr αποικιών η διαλογή βακτηριακού (E.Coli) ή της ζύμης κλωνοποιεί για τα σωστά ligation ή πλασμιδίων προϊόντα. Οι επιλεγμένες αποικίες των βακτηριδίων ή η ζύμη επιλέγονται με μια αποστειρωμένη άκρη toothpick ή σιφωνίων από ένα πιάτο αύξησης (αγαρόζη). Αυτό παρεμβάλλεται έπειτα στο pcr κύριο μίγμα ή προ-παρεμβάλλεται στο αποστειρωμένο ύδωρ. Pcr διευθύνεται έπειτα για να καθορίσει εάν η αποικία περιέχει το τεμάχιο DNA ή το πλασμίδιο ενδιαφέροντος.
Βακτηριακό pcr αποικιών E.Coli πρωτόκολλο
Pcr αποικιών γρήγορη prep μέθοδος
Βήμα 1:
Επιλέξτε μια βακτηριακή αποικία με αποστειρωμένη toothpick ή εισάγετε στο σιφώνιο την άκρη και την στροβιλιστείτε σε 25 μλ αποστειρωμένου TE dH2O σε έναν αποστειρωμένο microfuge σωλήνα. Μην αφαιρέστε την ολόκληρη αποικία, και χαρακτηρίστε την περιοχή που επιλέξατε preferrably τον αριθμό το κατώτατο σημείο του πιάτου (και του σωλήνα microfuge).
Βήμα 2:
Θερμάνετε το μίγμα σε ένα λουτρό βράζοντας ύδατος ή
τον καυτό (90-100C) φραγμό θέρμανσης για 2 λεπτά
Βήμα 3:
Δείγμα περιστροφής για την υψηλή ταχύτητα 2 λεπτών στο φυγοκεντρωτή.
Βήμα 4:
Μεταφέρετε 20 μλ του υπερκείμενου νερού σε έναν νέο σωλήνα microfuge.
Βήμα 5:
Πάρτε 1-2 μλ του υπερκείμενου νερού ως πρότυπο σε μια pcr μ25 λ τυποποιημένη pcr αντίδραση.
Pcr αποικιών ζύμης πρωτόκολλο
Πάρτε τα κύτταρα ζύμης που αυξήθηκαν σε ένα πιάτο φρέσκο από τον επωαστήρα 37C (η πρόσφατα αυξημένη ζύμη είναι καλύτερη)
Πάρτε αποστειρωμένη toothpick ή εισάγετε στο σιφώνιο την άκρη και αγγίξτε λίγη αποικία ζύμης. Μην ξύστε μακριά ολόκληρη μια αποικία. Το αναστείλετε τυποποιημένο pcr mastermix.
Pcr όροι ανακύκλωσης:
Πρώτο βήμα μετουσίωσης: 95 °C, 5 λ.
Βήμα μετουσίωσης: 95 °C, 30 SEC
Ανοπτώντας βήμα: 50-55 °C, 30 SEC
Βήμα επέκτασης: 72 °C, 1min/*KB
Επαναλάβετε το βήμαs 2-4: 34 Χρόνοι
Τελική επέκταση: 72 °C, 3 λ.
Φορτώστε την ολόκληρη pcr αντίδραση επάνω στο πήκτωμα αγαρόζης 1%.
Pcr αποικιών - δημοσιευμένη Pubmed έρευνα
Αμεσο pcr των άθικτων βακτηριδίων (pcr αποικιών). Σχετικά άρθρα
Αμεσο pcr των άθικτων βακτηριδίων (pcr αποικιών).
Μικροβιολογία 2008 Μάιος 3:Appendix Protoc Curr τρισδιάστατος
Συντάκτες: Υλοτόμος ΕΓΩ
Αυτό το πρωτόκολλο περιγράφει μια αποδοτική μέθοδο για τα άθικτα βακτηρίδια για την παρουσία επιθυμητών ακολουθιών DNA χρησιμοποιώντας την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσεων (pcr). Αυτή η μέθοδος αναφέρεται συνήθως ως pcr αποικιών.
PMID: 18770531 [ PubMed - στη διαδικασία ]