Pcr καθαρισμός
Pcr υπόβαθρο καθαρισμού
Γενικά, περισσότερο βελτιστοποιείτε αρχικά pcr σας, λιγότερο θα είναι η ανάγκη σας για τις αυστηρές μεθόδους καθαρισμού μετα-πθρ.
Εάν pcr σας οι όροι βελτιστοποιούνται καλά, ο μεγαλύτερος μέρος των προστιθέμενων εγχυτήρων και dNTP's σας θα καταναλωθεί κατά τη διάρκεια των pcr ενισχύσεων, κατά συνέπεια θα υπάρξουν μόνο πολύ λίγοι παρεμβαίνοντας παράγοντες και μπορεί να είναι δυνατό να πραγματοποιηθεί η άμεση αλληλοuχία. Εάν είστε πηγαίνοντας υπο--κλώνος pcr σας το τεμάχιο σε ένα διάνυσμα κλωνοποίησης TOPO, κατόπιν πρέπει να έχετε μόνο μια σημαντική pcr ζώνη ορατή στο πήκτωμά σας. Εάν έχετε τις πολλαπλάσιες ζώνες, σιγουρευτείτε ότι βελτιστοποιείτε pcr σας τους όρους πρώτα.
Επίσης δείτε pcr το προϊόν και pcr.
Pcr τα προϊόντα δεν πρέπει να καθαριστούν πριν από την αλληλοuχία εντούτοις για να λάβει τα ακριβή στοιχεία αλληλοuχίας, συστήνεται συνήθως να καθαριστούν επάνω pcr σας τα προϊόντα μετά από την ενίσχυση.
Εάν έχετε προσθέσει τα υπερβολικά ποσά εγχυτήρων ή οι εγχυτήρες είναι αχρησιμοποίητοι, αυτοί οι εγχυτήρες μπορούν να ενεργήσουν ως εγχυτήρες επέκτασης κατά τη διάρκεια της αλληλοuχίας, με συνέπεια την παραγωγή ενός πρόσθετου συνόλου ουσία-επονομαζόμενων τεμαχίων αλληλοuχίας που μπορούν να κάνουν την αλληλοuχία της ερμηνείας στοιχείων δύσκολης εάν μη αδύνατος.
Pcr μετα-καθαρισμού prducts πρέπει να οργανωθεί σε ένα πήκτωμα αγαρόζης για να εξετάσει την ποιότητα του καθαρισμού. Εάν οι λερώνοντας ή πολλαπλάσιες ζώνες είναι παρούσες, η κηλίδα προϊόντων, εσείς συνήθως υψηλής ποιότητας στοιχεία ακολουθίας obatin.
Ο καθαρισμός πηκτωμάτων του τεμαχίου μπορεί να ολοκληρωθεί χρησιμοποιώντας ένα χαμηλό αγαρόζη λειώνω-θερμοκρασίας. Μπορείτε να αφαιρέσετε τη ζώνη σας κάτω από το UV φως με ένα ξυράφι, και να εξαγάγετε το DNA από τη φέτα χρησιμοποιώντας τις μεθόδους electroelution ή εξαγωγής πηκτωμάτων χρησιμοποιώντας τους απομονωτές/τις στήλες.
Pcr καθαρισμός για την αλληλοuχία και την κλωνοποίηση
Για να απομακρύνετε υπερβολικό dNTPs, τους ασυγχώνευτους εγχυτήρες, και τα μη συγκεκριμένα pcr προϊόντα μπορείτε να χρησιμοποιήσετε διάφορες μεθόδους.
Pcr Qiagen εξάρτηση καθαρισμού και άλλες pcr εξαρτήσεις καθαρισμού.
Μπορείτε επίσης να αφαιρέσετε τους εγχυτήρες και dNTPs με το τρέξιμο των pcr προϊόντων σε ένα πήκτωμα αγαρόζης, την κοπή των ζωνών έξω και τη διεύθυνση της εξαγωγής DNA από το πήκτωμα αγαρόζης χρησιμοποιώντας την εξάρτηση καθαρισμού πηκτωμάτων Qiagen.
Μετά από pcr τον καθαρισμό
Μετά από οποιαδήποτε pcr μέθοδο καθαρισμού, πρέπει να καθιερώσετε την ποιότητα και την ποσότητα του pcr προϊόντος. Μπορείτε να κάνετε αυτό με το τρέξιμο των δειγμάτων χρησιμοποιώντας το πήκτωμα αγαρόζης electrophoreiss μαζί με έναν δείκτη συγκέντρωσης DNA.
Μπορείτε επίσης να υπολογίσετε την ποσότητα του DNA χρησιμοποιώντας UV spectrophotometer.