Σε πραγματικό χρόνο pcr
PCR ΠΡΑΓΜΑΤΙΚΟΥ ΧΡΟΝΟΥ : Μια εισαγωγή
Αν και οι παραδοσιακές μέθοδοι mRNA είναι αρκετά καλές όπως το βόρειο λέκιασμα και η κανονική υβριδοποίηση, δεν πλησιάζουν την ευκολία και την ταχύτητα pcr πραγματικού χρόνου.
Ρτ-πθρ ή αντίστροφο pcr transcriptase πρόκειται ημιποσοτικός να πρέπει να φορτώσει τα δείγματα σε ένα πήκτωμα και την αναισθησία ethidium του βρωμίδιου. Κατά συνέπεια, pcr πραγματικού χρόνου αναπτύχθηκε από την ανάγκη να ποσολογηθούν οι διαφορές στην έκφραση mRNA κατά τρόπο εύκολο και γρήγορο, και λόγω στην ανάγκη να χρησιμοποιήσει των μικρών ποσών του mRNA όπως εκείνοι που λήφθηκαν από τα μικρά δείγματα ιστού, και LCM (το λέιζερ συλλαμβάνει το microdissection) απομόνωσε τα κύτταρα.
Σε πραγματικό χρόνο pcr αντίστροφος- transcriptase (RT) είναι διαφορετικό από άλλο ποσοτικό pcr δεδομένου ότι ποσολογεί το αρχικό ποσό του προτύπου αντί της ανίχνευσης του ποσού τελικού ενισχυμένου προϊόντος (φρεεμαν, 1999 Raeymaekers, 2000).
Pcr πραγματικού χρόνου χαρακτηρίζεται από το σημείο εγκαίρως κατά τη διάρκεια της ανακύκλωσης όταν ανιχνεύεται αρχικά η ενίσχυση του pcr προϊόντος ενδιαφέροντοσ παρά το ποσό του pcr προϊόντος ενδιαφέροντος που συσσωρεύεται στο σημείο τέλους μετά από pcr που περιείχε έναν μεγάλο αριθμό κύκλων. Pcr πραγματικού χρόνου κάνει αυτό με τον έλεγχο του ποσού φθορισμού που εκπέμπεται κατά τη διάρκεια της pcr αντίδρασης, και αυτό ενεργεί ως δείκτης του ποσού pcr ενίσχυσης που εμφανίζεται κατά τη διάρκεια κάθε pcr κύκλου. Κατά συνέπεια, στις νεώτερες pcr πραγματικού χρόνου μηχανές, κάποια μπορεί οπτικά να δει την πρόοδο της αντίδρασης στο "πραγματικό χρόνο".
Pcr πραγματικού χρόνου έχει επίσης μια πολύ ευρύτερη δυναμική περιοχή μέχρι των 107-πτυχών (έναντι των 1000-πτυχών στο συμβατικό ρτ-πθρ). Η δυναμική περιοχή μιας δοκιμής καθορίζει πόσο η συγκέντρωση στόχων μπορεί να ποικίλει και όμως ακόμα ποσολογείται. Αυτή η ευρεία δυναμική περιοχή οδηγεί επίσης σε έναν ακριβέστερο ποσοτικό προσδιορισμό.