Comienzo Caliente PCR - Reacción en Cadena De la
Polimerasa De HotStart.
Comienzo Caliente PCR: Una Introducción
El comienzo caliente PCR permite la inhibición de la actividad de la polimerasa durante la preparación de la reacción de PCR. Limitando actividad de la polimerasa antes de PCR que completa un ciclo, el comienzo caliente PCR reduce la amplificación no específica y aumenta la producción de blanco del producto de PCR.
El comienzo caliente PCR es realizado comúnmente usando modificaciones, métodos de la encerar-barrera, y la inhibición químicos incluidos por un anticuerpo taq-dirigido.
PCR o la reacción en cadena de la polimerasa utiliza las polimerasas que fueron aisladas de organismos termoestables tales como la enzima de Taq, un tipo eubacterial polimerasa de la DNA de I, y Pfu, un tipo archaeal polimerasa de la DNA de la DNA de B.
PCR amplifica la DNA por los ciclos múltiples de derretir la DNA en la temperatura alta, de recocer las cartillas en una temperatura más baja, y después de permitir la extensión de la polimerasa en una temperatura intermedia. Desafortunadamente, estas polimerasas thermophilic de la DNA demuestran una actividad muy pequeña pero mensurable de la polimerasa en la temperatura ambiente durante el montaje del experimento.
Esta actividad ineficaz de la polimerasa de la DNA catalizará la extensión de cualquier extremo recocido 3'. Después de la amplificación de PCR, el producto que resulta contiene una mezcla de vendas específicas y no específicas. Por otra parte, el 5'-3 ' actividad del exonuclease del polymerasel de la DNA degrada cualquier 5 ' extremos libre de ácidos nucleic parcialmente recocidos, destruyendo los substratos de la cartilla y de la plantilla de la reacción de la polimerasa. Esto da lugar a una producción más baja del producto deseado del pcr.
Comienzo Caliente PCR: Publicaciones
DNTPs de Activatable 3'-modified del calor: Síntesis y uso para el comienzo caliente PCR. Artículos Relacionados
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Ácidos Nucleic Symp Ser (Oxf). 2008;(52):259-60
Autores: Koukhareva I, Haoqiang H, Yee J, Shum J, Paul N, Hogrefe RI, Lebedev Sistema de pesos americano
Varios derivados 3'-ether y 3'-ester de 2'-deoxyribonucleoside 5'-triphosphates (dNTPs) fueron preparados. Estos derivados del dNTP no eran substratos para la polimerasa de la DNA y no apoyaron la extensión superelegante en la temperatura ambiente. Sin embargo, por precalentar corto a 95 grados de C en almacenador intermediario de PCR, estos dNTPs 3'-modified se pueden convertir a los dNTPs naturales sin modificar correspondientes que apoyan eficientemente la amplificación de PCR. El análisis de los productos de PCR obtenidos con los dNTPs 3'-modified reveló una mejora significativa en funcionamiento de PCR dando por resultado una producción más alta del amplicon y redujo la formación de los productos de la apagado-blanco (mis-oscurecimiento y dimer de la cartilla). Entre los dNTPs estudiados 3'-modified, los derivados 3'-tetrahydrofuranyl demostraron los mejores resultados.
PMID: 18776352 [ PubMed - en proceso ]