PCR Jerarquizado
PCR Jerarquizado
Definición de PCR jerarquizado:
PCR jerarquizado es una variación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), en que dos pares (en vez de un par) de cartillas de PCR están utilizados para amplificar un fragmento.
El primer par de cartillas de PCR amplifica un fragmento similar a un PCR estándar. Sin embargo, un segundo par de cartillas llamó el interior jerarquizado del lazo de las cartillas (como mienten /.are jerarquizado dentro del primer fragmento) el primer fragmento del producto de PCR para permitir la amplificación de un segundo producto de PCR que es más corto que primer.
La ventaja de PCR jerarquizado es que si el fragmento incorrecto de PCR fuera amplificado, la probabilidad es absolutamente baja que la región sería amplificada una segunda vez por el segundo sistema de cartillas. Así, PCR jerarquizado es una amplificación muy específica de PCR.
La Reacción Jerarquizada de PCR
PCR jerarquizado requiere dos sistemas de las cartillas que se utilizan para amplificar un fragmento específico de la DNA usando dos funcionamientos separados de PCR. El segundo par de cartillas funciona para amplificar un fragmento más pequeño de la DNA del específico situado dentro del primer producto de PCR.
Diagrama Jerarquizado De la Reacción de PCR
Pasos del PCR jerarquizado
Paso Uno: La plantilla de la blanco de la DNA es limitada por el primer sistema de cartillas demostradas en azul. Las cartillas pueden atar al alternativa, los sitios obligatorios de la cartilla similar que dan los productos múltiples sin embargo solamente uno de estos productos de PCR dan la secuencia prevista (productos múltiples no demostrados).
Paso Dos: Los productos de PCR de la primera reacción de PCR se sujetan a un segundo PCR funcionado sin embargo con un segundo nuevo sistema de cartillas demostradas en rojo.
Mientras que estas cartillas SE JERARQUIZAN dentro del primer producto de PCR, hacen muy inverosímil que el producto non-specifically amplificado de PCR contendría los sitios obligatorios para ambos sistemas de cartillas. Esta amplificación jerarquizada de PCR se asegura de que el producto de PCR de la segunda amplificación de PCR tiene poco o nada de contaminación de productos non-specifically amplificados de PCR de secuencias alternativas de la blanco de la cartilla.
Protocolo jerarquizado de PCR
Vea El Protocolo Jerarquizado de PCR
PCR Jerarquizado: Publicaciones
PCR jerarquizado para la detección rápida de TB del líquido pleural en HUKM Malasia. Artículos Relacionados
PCR jerarquizado para la detección rápida de TB del líquido pleural en HUKM Malasia.
Biol Sci De Pak J. 2008 julio 1;11(13):1728-32
Autores: Salleh Sa, Hussin S, Rahman Milímetro
La puntería del actual estudio es detección rápida de la tuberculosis de la efusión pleural de pacientes sospechados. La reacción en cadena jerarquizada técnica molecular de la polimerasa (PCR) fue utilizada para el propósito. Un total de 67 que el líquido pleural recogió en la universidad Kebangsaan Malasia del hospital durante mayo de 2005 a octubre 2006 fue enviado al laboratorio de la microbiología alistado en el estudio. El índice de la detección de la tuberculosis del mycobacterium en la efusión pleural era el 0% por los bacilos acid-fast (AFB) que se manchaban y 1.5% por la cultura en el medio de Lowenstein-Jensen. La tuberculosis del mycobacterium fue detectada por PCR en el 9% de los casos. PCR del líquido pleural tenía la sensibilidad del 19% y especificidad del 96%, comparadas a mancharse de AFB (sensibilidad del 0% y la especificidad 100%) y a cultura (sensibilidad del 4% y la especificidad 100%). PCR también tiene el valor profético positivo del 67% (PPV) y valor profético negativo del 72% (NPV) en la detección de tuberculosis del mycobacterium. El líquido ofpleural de la cultura tiene el 100% PPV y 71% NPV mientras que AFB que se mancha tiene el 0% PPV y 31% NPV. Este estudio preliminar demostró que PCR es un método rápido para la detección de la tuberculosis del mycobacterium en líquido pleural pero su sensibilidad no está encima del marcado.
PMID: 18819627 [ PubMed - en proceso ]