Limpieza de PCR
Fondo De la Limpieza de PCR
Generalmente, cuanto más que usted optimiza inicialmente su PCR, serán menos su necesidad de métodos rigurosos de la limpieza de post-PCR.
Si sus condiciones de PCR se optimizan bien, la mayoría de sus cartillas agregadas y de la voluntad de los dNTP se utilice para arriba durante las amplificaciones del pcr, así habrá solamente muy pocos factores que interfieren y puede ser posible realizar ordenar directo. Si usted va secundario-reproduzca su fragmento de PCR en un vector de la reproducción del TOPO, después usted necesita tener solamente una venda importante de PCR visible en su gel. Si usted tiene vendas múltiples, se cerciora de usted optimizar sus condiciones de PCR primero.
También vea el producto de PCR el ordenar y el optimizar de PCR.
Los productos de PCR no necesitan ser purificados antes de ordenar sin embargo para obtener los datos que ordenan exactos, él se recomiendan generalmente limpiar encima de sus productos de PCR después de la amplificación.
Si usted ha agregado cantidades excesivas de la cartilla o las cartillas son inusitadas, estas cartillas pueden actuar como cartillas de la extensión durante ordenar, dando por resultado la generación de un sistema adicional de los fragmentos que ordenan teñir-etiquetados que pueden hacer ordenar la interpretación de los datos si no imposible difícil.
los prducts de la Poste-limpieza PCR se deben funcionar en un gel del agarose para examinar la calidad de la purificación. Si el mancharse o las vendas múltiples está presentes, borrón de transferencia de los productos, usted no generalmente los datos de la secuencia de la alta calidad del obatin.
La purificación del gel del fragmento se puede lograr usando un agarose bajo de la derretir-temperatura. Usted puede quitar su venda bajo luz UV con una maquinilla de afeitar, y extrae la DNA de la rebanada usando métodos de la extracción del electroelution o del gel usando almacenadores intermediarios/columnas.
Limpieza de PCR para ordenar y reproducirse
Para quitar exceso de dNTPs, unincorporated las cartillas, y los productos no específicos de PCR que usted puede utilizar varios métodos.
Kit de la purificación de Qiagen PCR y otros kits de la limpieza de PCR.
Usted puede también quitar las cartillas y los dNTPs funcionando los productos de PCR en un agarose se gelifican, cortando las vendas hacia fuera y conduciendo la extracción de la DNA del gel del agarose usando el kit de la purificación del gel de Qiagen.
Después De Limpieza de PCR
Después de cualquier método de la limpieza de PCR, usted debe establecer la calidad y la cantidad del producto de PCR. Usted puede hacer esto funcionando las muestras usando electrophoreiss del gel del agarose junto con un marcador de la concentración de la DNA.
Usted puede también estimar la cantidad de DNA usando un espectrofotómetro UV.