Cartillas de PCR
Definición de una cartilla de PCR:
Las cartillas de PCR solo-se trenzan brevemente, los oligonucleotides sintético sintetizados generalmente más pronto de 50 nucleotides (a menudo 18-25 nucleotides).
Usos de las cartillas de PCR
Las cartillas de PCR son tan importantes que son complementarias al principio y al extremo del fragmento de la DNA del interés que uno necesita amplificar. Las cartillas por lo tanto seleccionan los límites de la región para ser amplificadas por PCR. Durante el ciclo del recocido de PCR, las cartillas de PCR recuecen a la región complementaria de la DNA. El atascamiento y los 3 OH de la polimerasa’ de la DNA del oligo permite que la síntesis de la DNA ocurra.
Cartillas de PCR Que eligen
Factores Importantes A considerar Cuando Cartillas Que eligen:
- Tm óptimo (~ 50-60°C del recocido T)
- El Cromatografi'a-contenido del oligonucleotide debe estar entre 40-60%.
- Tm calculado (temperatura que derrite) para ambas cartillas usadas en la reacción no debe diferenciar > 5°C.
- La temperatura superelegante del recocido es generalmente 5°C debajo del Tm más bajo calculado. Sin embargo debe ser elegida empírico para las condiciones individuales.
- Las horquillas uno mismo-complementarias internas de > 4 y de dimers > 8 deben ser evitadas.
- el término 3' es extremadamente caso sensible - no debe ser complementario a ninguna región de la otra cartilla usada en la reacción y debe proporcionar la base correcta que empareja a la plantilla.
- Si es posible, las cartillas deben comenzar y extremo con 1-2 G o residuos de C
- Las cartillas no deben tener ninguna estructura o uno mismo-complementariedad secundaria del extendisve (puede dar lugar a Cartilla-primer-dimers).
Diseño De la Cartilla de PCR
Programas para asistirle en diseño de la cartilla de PCR:
Primer3
WebPrimer
Encuéntrelos aquí - las herramientas de diseño de la cartilla de PCR.