PCR En tiempo real
PCR EN TIEMPO REAL : Una Introducción
Aunque los métodos tradicionales de cuantificar mRNA son bastante buenos por ejemplo borrar norteño y el hibridación in situ, no acercan a la facilidad y a la velocidad de PCR en tiempo real.
RT-PCR o el transcriptase reverso PCR debe semi-quantitative necesitar cargar muestras en un gel y la insensibilidad del bromuro de ethidium. Así, PCR en tiempo real fue desarrollado fuera de la necesidad de cuantificar diferencias en la expresión del mRNA de una manera fácil y rápida, y debido a la necesidad de utilizar de cantidades pequeñas de mRNA tales como ésos obtuvo por las muestras pequeñas del tejido fino, y LCM (microdissection de la captura del laser) aisló las células.
(RT) PCR reverso-transcriptase en tiempo real es diferente del otro PCR cuantitativo como cuantificó la cantidad inicial de la plantilla en vez de detectar la cantidad de producto amplificado final (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
PCR en tiempo real es caracterizado por el punto en tiempo durante completar un ciclo en que la amplificación del producto de PCR del interés primero se detecta más bien que la cantidad del producto de PCR del interés que se acumula en el límite después de PCR que contuvo una gran cantidad de ciclos. PCR en tiempo real hace esto supervisando la cantidad de fluorescencia emitida durante la reacción de PCR, y éste actúa como indicador de la cantidad de amplificación de PCR que ocurra durante cada ciclo de PCR. Así, en máquinas más nuevas del tiempo real PCR, una puede ver visualmente el progreso de la reacción en "tiempo real".
PCR en tiempo real también tiene una gama dinámica mucho más ancha hasta de 107-fold (comparado a 1000-fold en RT-PCR convencional). La gama dinámica de un análisis se determina cuánto puede variar la concentración de la blanco pero todavía ser cuantificado. Esta gama dinámica ancha también da lugar a una cuantificación más exacta.