Polimerización en cadena en tiempo real
POLIMERIZACIÓN EN CADENA EN TIEMPO REAL: Una introducción
Aunque los métodos tradicionales de cuantificar el mRNA sean bastante buenos por ejemplo borrar norteño y el hibridación in situ, no se acercan a la facilidad y a la velocidad de la polimerización en cadena en tiempo real.
RT-PCR o la polimerización en cadena reversa del transcriptase debe semiquantitativo necesitar cargar muestras en un gel y la insensibilidad del bromuro de etidio. Así, la polimerización en cadena en tiempo real fue desarrollada fuera de la necesidad de cuantificar diferencias en la expresión del mRNA de una manera fácil y rápida, y debido a la necesidad de utilizar de pequeñas cantidades de mRNA tales como ésos obtuvo por las pequeñas muestras de tejido, y LCM (microdissection de la captura del laser) aisló las células.
(RT) la polimerización en cadena reversa-transcriptase en tiempo real es diferente de la otra polimerización en cadena cuantitativa pues cuantifica la cantidad inicial del modelo en vez de detectar la cantidad de producto amplificado final (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
La polimerización en cadena en tiempo real es caracterizada por la punta a tiempo durante el ciclo en que la amplificación del producto de la polimerización en cadena del interés primero se detecta algo que la cantidad del producto de la polimerización en cadena del interés que se acumula en la punto final después de la polimerización en cadena que contuvo una gran cantidad de ciclos. La polimerización en cadena en tiempo real hace esto vigilando la cantidad de fluorescencia emitida durante la reacción de la polimerización en cadena, y ésta actúa como indicador de la cantidad de amplificación de la polimerización en cadena que ocurra durante cada ciclo de la polimerización en cadena. Así, en máquinas más nuevas de la polimerización en cadena del tiempo real, una puede ver visualmente el progreso de la reacción en “tiempo real”.
La polimerización en cadena en tiempo real también tiene un rango dinámico mucho más ancho del doblez hasta 107 (comparado al doblez 1000 en RT-PCR convencional). El rango dinámico de un análisis determina cuánto puede variar la concentración de blanco pero todavía ser cuantificado. Este rango dinámico ancho también da lugar a una cuantificación más exacta.