Début Chaud PCR - Réaction en chaîne De Polymérase
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Début Chaud PCR : Une Introduction
Le début chaud PCR permet l'inhibition de l'activité de polymérase pendant la préparation de réaction de PCR. En limitant l'activité de polymérase avant PCR faisant un cycle, le début chaud PCR réduit l'amplification non spécifique et augmente le rendement indicatif de produit de PCR.
Le début chaud PCR est généralement effectué en employant des modifications, des méthodes de cirer-barrière, et l'inhibition chimiques incluses par un anticorps taq-dirigé.
PCR ou réaction en chaîne de polymérase emploie les polymérases d'ADN qui ont été isolées dans les organizations thermostables telles que l'enzyme de Taq, un type eubacterial polymérase d'ADN d'I, et Pfu, un type archaeal polymérase d'ADN de B.
PCR amplifie l'ADN par les cycles multiples de fondre l'ADN à température élevée, de recuire des amorces à une plus basse température, et puis de permettre la prolongation de polymérase à une température intermédiaire. Malheureusement, ces polymérases thermophiles d'ADN montrent une activité très petite mais mesurable de polymérase à la température ambiante pendant l'ensemble de l'expérience.
Cette activité inefficace de polymérase d'ADN catalysera la prolongation de toutes les extrémités 3'recuites. Après amplification de PCR, le produit résultant contient un mélange des bandes spécifiques et non spécifiques. D'ailleurs, le 5'-3 'activité d'exonuclease du polymerasel d'ADN dégrade toutes les 5 'extrémités libres des acides nucléiques partiellement recuits, détruisant les substrats d'amorce et de calibre de la réaction de polymérase. Ceci a comme conséquence un rendement inférieur du produit désiré de pcr.
Début Chaud PCR : Publications
DNTPs d'Activatable 3'-modified de la chaleur : Synthèse et demande de début chaud PCR. Articles Relatifs
DNTPs d'Activatable 3'-modified de la chaleur : Synthèse et demande de début chaud PCR.
Acides Nucléiques Symp Ser (Oxf). 2008;(52):259-60
Auteurs : Koukhareva I, Haoqiang H, Yee J, Shum J, Paul N, Hogrefe RI, Lebedev Poids du commerce
Plusieurs dérivés 3'-ether et 3'-ester de 2'-deoxyribonucleoside 5'-triphosphates (dNTPs) ont été préparés. Ces dérivés de dNTP n'étaient pas des substrats pour la polymérase d'ADN et n'ont pas soutenu la prolongation mieux habillée à la température ambiante. Cependant, par le préchauffage court à 95 degrés de C dans l'amortisseur de PCR, ces dNTPs 3'-modified peuvent être convertis en dNTPs normaux non modifiés correspondants qui soutiennent efficacement l'amplification de PCR. L'analyse des produits de PCR obtenus avec les dNTPs 3'-modified a indiqué une amélioration significative d'exécution de PCR ayant pour résultat un plus grand rendement d'amplicon et a réduit la formation des produits d'au loin-cible (mis-amoricage et dimère d'amorce). Parmi les dNTPs 3'-modified étudiés, les dérivés 3'-tetrahydrofuranyl ont montré les meilleurs résultats.
PMID : 18776352 [ PubMed - dans le processus ]