Dépannage d'ACP
Problèmes d'ACP et solutions, aide d'ACP
Quel est votre problème d'ACP ? :
Longs produits non spécifiques d'ACP ?
Problème :
Longs produits non spécifiques dans l'ACP
En exécutant un gel d'agarose vous repérez de plus grandes bandes non spécifiques d'ACP qui ne sont pas les exactes classent.
Solutions à de longs produits non spécifiques dans l'ACP :
Diminuez le temps de recuit
Diminuez le temps d'extension
Diminuez la température d'extension à 62-68º C
Augmentez la concentration en KCl (mémoire tampon) à 1.2x-2x, mais gardez la concentration en mgcl2 à 1.5-2mM
Augmentez la concentration en mgcl2 jusqu'à 3-4.5 millimètres mais gardez la constante de concentration de dNTP.
Utilisez moins d'amorce
Prenez moins de descripteur d'ADN
Prenez moins de polymérase de Taq
Si aucun des travaux ci-dessus : examinez l'amorce pour assurer les ordres réitérés (le SOUFFLE alignent l'ordre avec les bases de données) et changez les amorces
Combinaison de certains/tout les en haut.
Problème :
Dimères d'amorce d'ACP
En exécutant un gel d'agarose, vous repérez quelques bandes très petites d'ACP. Ce sont la taille de votre amorce ou au sujet de la taille des deux vos amorces (A et B) ensemble. Celles-ci se nomment des « dimères d'amorce » et sont constituées par le recuit de votre amorce avec elle-même ou avec l'autre amorce.
Solutions aux dimères d'amorce dans l'ACP :
Utilisez moins d'amorce.
L'amorce de conception et commandent un nouveau lot. Assurez-vous vous logiciel et contrôle de conception d'amorce d'utilisation pour l'individu-recuit et que les amorces ne partagent pas un grand pourcentage de l'ordre complémentaire. Examinez les amorces soigneusement pour assurer le homo-dimère et la formation de hetero-dimère avec OligoAnalyzer
Conduisez l'ACP avec et sans du formamide.
Titrez la concentration de Mg2+ (MgCl - 1.5, 2.0, 2.5 et 3.0 millimètres).
Augmentez la quantité de descripteur d'ADN (concentration).
Augmentez la température de recuit (essai optimalisant utilisant une machine d'ACP de gradient pour trouver la température optimale pour le recuit).
Essayez d'ajouter DMSO jusqu'à 5%.
Essayez d'utiliser l'ACP de HotStart au lieu de l'ACP régulier de polymérase de Taq.
Combinaison de certains/tout les en haut.