PCR En temps réel
PCR EN TEMPS RÉEL : Une Introduction
Bien que les méthodes traditionnelles de doser le mRNA soient assez bonnes comme éponger nordique et hybridation in situ, elles n'approchent pas la facilité et la vitesse de PCR en temps réel.
RT-PCR ou transcriptase renversé PCR est semi-finale-quantitative devant devoir charger des échantillons sur un gel et l'insensibilité du bromure d'éthidium. Ainsi, PCR en temps réel a été développé hors de la nécessité de doser des différences dans l'expression de mRNA d'une façon facile et rapide, et en raison de la nécessité d'employer d'un peu de mRNA de ce type a obtenu par de petits échantillons de tissu, et LCM (microdissection de capture de laser) a isolé des cellules.
(droite) PCR renversé-transcriptase en temps réel est différent de l'autre PCR quantitatif comme il dose la quantité initiale du calibre au lieu de détecter la quantité de produit amplifié final (Freeman, 1999 ; Raeymaekers, 2000).
PCR en temps réel est caractérisé par le point à temps pendant le cycle où l'amplification du produit de PCR d'intérêt est d'abord détecté plutôt que la quantité du produit de PCR d'intérêt qui est accumulé à la limite après PCR qui a contenu un grand nombre de cycles. PCR en temps réel fait ceci en surveillant la quantité de fluorescence émise pendant la réaction de PCR, et ceci agit en tant qu'indicateur de la quantité d'amplification de PCR qui se produit pendant chaque cycle de PCR. Ainsi, dans de plus nouvelles machines du temps réel PCR, on peut visuellement voir le progrès de la réaction dans le "temps réel".
PCR en temps réel a également un choix dynamique beaucoup plus grand de jusqu'à 107-fold (comparé à 1000-fold dans RT-PCR conventionnel). La gamme dynamique d'une analyse détermine combien la concentration de cible peut changer mais toujours être mesuré. Ce grand choix dynamique a également comme conséquence une quantitation plus précise.