Inizio Caldo PCR - Reazione a catena Della Polimerasi Di
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Inizio Caldo PCR: Un'Introduzione
L'inizio caldo PCR permette l'inibizione di attività della polimerasi durante la preparazione di reazione di PCR. Limitando l'attività della polimerasi prima di PCR che cicla, l'inizio caldo PCR riduce l'amplificazione di non-specifico ed aumenta il rendimento indicativo del prodotto di PCR.
L'inizio caldo PCR è realizzato comunemente usando le modifiche, i metodi della incer-barriera e l'inibizione chimici inclusi da un anticorpo taq-diretto.
PCR o la reazione a catena della polimerasi usa le polimerasi che sono state isolate dagli organismi termostabili quali l'enzima di Taq, un tipo eubacterial la polimerasi del DNA di I e Pfu, un tipo archaeal la polimerasi del DNA del DNA di B.
PCR amplifica il DNA dai cicli multipli di fusione del DNA a temperatura elevata, di tempera degli iniettori ad una temperatura più insufficiente ed allora di permettere l'estensione della polimerasi ad una temperatura intermedia. Purtroppo, queste polimerasi termofile del DNA mostrano un'attività molto piccola ma misurabile della polimerasi alla temperatura ambiente durante il montaggio dell'esperimento.
Questa attività inefficiente della polimerasi del DNA catalizzerà l'estensione di tutte le estremità temprate 3'. Dopo l'amplificazione di PCR, il prodotto risultante contiene una miscela delle fasce di non-specifico e specifiche. Inoltre, il 5'-3 'attività di exonuclease del polymerasel del DNA degrada tutte le 5 'estremità libere degli acidi nucleici parzialmente temprati, distruggendo i substrati della mascherina e dell'iniettore della reazione della polimerasi. Ciò provoca un rendimento più basso del prodotto voluto del pcr.
Inizio Caldo PCR: Pubblicazioni
DNTPs activatable 3'-modified di calore: sintesi e domanda di inizio caldo PCR. Articoli Relativi
DNTPs activatable 3'-modified di calore: sintesi e domanda di inizio caldo PCR.
Acidi Nucleici Symp Ser (Oxf). 2008;(52):259-60
Autori: Koukhareva I, Haoqiang H, Yee J, Shum J, Paul N, Hogrefe RI, Lebedev Avoirdupois
Parecchi derivati 3'-ether e 3'-ester di 2'-deoxyribonucleoside 5'-triphosphates (dNTPs) sono stati preparati. Questi derivati del dNTP non erano substrati per la polimerasi del DNA e non hanno sostenuto l'estensione più superelegante alla temperatura ambiente. Tuttavia, dal preriscaldamento corto a 95 gradi di C nell'amplificatore di PCR, questi dNTPs 3'-modified possono essere convertiti in dNTPs naturali invariati corrispondenti che sostengono efficientemente l'amplificazione di PCR. L'analisi dei prodotti di PCR ottenuti con i dNTPs 3'-modified ha rivelato un miglioramento significativo nelle prestazioni di PCR con conseguente più grande rendimento del amplicon ed ha ridotto la formazione dei prodotti dell'fuori-obiettivo (mis-innesco e dimero dell'iniettore). Fra i dNTPs studiati 3'-modified, i derivati 3'-tetrahydrofuranyl hanno mostrato i risultati migliori.
PMID: 18776352 [ PubMed - in lavorazione ]