Pulizia di PCR
Priorità bassa Di Pulizia di PCR
Generalmente, di più che inizialmente ottimizzate il vostro PCR, più di meno saranno la vostra esigenza dei metodi rigorosi di pulizia di post-PCR.
Se i vostri stati di PCR sono ottimizzati bene, la maggior parte dei vostri iniettori aggiunti e della volontà dei dNTP sono usate in su durante le amplificazioni del pcr, così ci saranno soltanto molto pochi fattori interferenti e può essere possibile effettuare ordinare diretto. Se state andando secondario-cloni il vostro frammento di PCR in un vettore della clonazione di TOPO, quindi dovete avere soltanto una fascia principale di PCR visibile sul vostro gel. Se avete fasce multiple, vi assicurate ottimizzare i vostri stati di PCR in primo luogo.
Inoltre veda il prodotto di PCR ordinare ed ottimizzare PCR in serie.
I prodotti di PCR non devono essere purificati prima dell'ordinare tuttavia per ottenere i dati ordinanti esatti, esso solitamente è suggerito pulire i vostri prodotti di PCR dopo l'amplificazione.
Se avete aggiunto gli importi eccessivi dell'iniettore o gli iniettori sono inutilizzati, questi iniettori possono fungere da iniettori di estensione durante ordinare, con conseguente generazione di un insieme supplementare dei frammenti ordinanti ting-identificati che possono fare ordinare l'interpretazione in serie di dati se non impossibile difficile.
i prducts di Alberino-pulizia PCR dovrebbero essere fatti funzionare su un gel dell'agarosi per esaminare la qualità della purificazione. Se spalmare o le fasce multiple è presenti, sbavatura dei prodotti, non solitamente dati di sequenza di alta qualità di obatin.
La purificazione del gel del frammento può essere compiuta usando un'agarosi bassa di fond-temperatura. Potete rimuovere la vostra fascia sotto luce UV con un rasoio ed estraete il DNA dalla fetta usando i metodi dell'estrazione del gel o di electroelution usando gli amplificatori/colonne.
Pulizia di PCR per ordinare e clonare
Per rimuovere i dNTPs eccedenti, unincorporated gli iniettori ed i prodotti che di non-specifico PCR potete usare parecchi metodi.
Corredo di purificazione di Qiagen PCR ed altri corredi di pulizia di PCR.
Potete anche rimuovere gli iniettori ed i dNTPs facendo funzionare i prodotti di PCR su un'agarosi si gelificano, tagliando le fasce fuori e conducendo l'estrazione del DNA dal gel dell'agarosi usando il corredo di purificazione del gel di Qiagen.
Dopo Pulizia di PCR
Dopo tutto il metodo di pulizia di PCR, dovreste stabilire la qualità e la quantità del prodotto di PCR. Potete fare questo facendo funzionare i campioni usando i electrophoreiss del gel dell'agarosi con un indicatore di concentrazione nel DNA.
Potete anche valutare la quantità di DNA usando uno spettrofotometro UV.