PCR In tempo reale
PCR IN TEMPO REALE : Un'Introduzione
Anche se i metodi tradizionali della quantificazione del mRNA sono ragionevolmente buoni quali macchiarsi nordico e l'ibridazione in situ, non si avvicinano alla facilità ed alla velocità di PCR in tempo reale.
RT-PCR o il transcriptase d'inversione PCR è dovuto semiquantitativo avere bisogno di di caricare i campioni su un gel e l'insensibilità del bromuro di etidio. Quindi, PCR in tempo reale è stato sviluppato dalla necessità di quantificare le differenze nell'espressione di mRNA in un modo facile e rapido e dovuto la necessità di usare di piccoli importi del mRNA come quelli si è verificato dai piccoli campioni del tessuto e LCM (microdissection di bloccaggio del laser) ha isolato le cellule.
(RT) PCR d'inversione-transcriptase in tempo reale è differente dall'altro PCR quantitativo come quantifica la quantità iniziale della mascherina invece di rilevazione della quantità di prodotto amplificato finale (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
PCR in tempo reale è caratterizzato dal punto a tempo durante ciclare in cui l'amplificazione del prodotto di PCR di interesse in primo luogo è rilevata piuttosto che la quantità del prodotto di PCR di interesse che è accumulato al end-point dopo PCR che ha contenuto tantissimi cicli. PCR in tempo reale fa questo controllando la quantità di fluorescenza emessa durante la reazione di PCR e questo funge da indicatore della quantità di amplificazione di PCR che si presenta durante l'ogni ciclo di PCR. Quindi, in più nuove macchine di tempo reale PCR, una può vedere visivamente il progresso della reazione in tempo reale "".
PCR in tempo reale inoltre ha una gamma dinamica molto più larga fino di 107-fold (confrontato a 1000-fold in RT-PCR convenzionale). La gamma dinamica di analisi determina quanto la concentrazione dell'obiettivo può variare ma ancora essere misurato. Questa gamma dinamica larga inoltre provoca una quantificazione più esatta.