連鎖反応ホットスタートPCR - HotStart のポリメラーゼの。
ホットスタートPCR: 導入
ホットスタートPCR はPCR の反作用の準備の間のポリメラーゼの活動の阻止を可能にする。循環するPCR 前のポリメラーゼの活動の制限によってホットスタートPCR は無指定の拡大を減らし、PCR プロダクトターゲット収穫を増加する。
ホットスタートPCR はtaq 指示された抗体による含まれた化学修正、ワックスを掛け障壁方法、および阻止の使用によって一般に行われる。
PCR かポリメラーゼの連鎖反応はTaq の酵素、eubacterial タイプI のDNA のポリメラーゼ、およびPfu のようなthermostable 有機体から隔離されたDNA のポリメラーゼのポリメラーゼarchaeal タイプをB のDNA の使用する。
PCR は低温で高温、プライマーをアニールすること、及び中間温度でポリメラーゼ延長を許可することで溶けるDNA の多数周期によってDNA を増幅する。 不運にも、これらの好熱性のDNA のポリメラーゼは実験のアセンブリの間の室温で非常に小さく測定可能なポリメラーゼの活動を示す。
この非能率的なDNA のポリメラーゼの活動はあらゆるアニールされた3' 端の延長に触媒作用を及ぼす。PCR の拡大の後で、生じるプロダクトは特定及び無指定バンドの混合物を含んでいる。さらに、5'-3 ' DNA のpolymerasel のexonuclease 活動部分的にアニールされた核酸の自由な5 つの' は端を低下させ、ポリメラーゼの反作用のプライマー及び型板の基質を破壊する。これは望ましいpcr プロダクトのより低い収穫で起因する。
ホットスタートPCR: 出版物
熱Activatable はdNTPs を3' 変更した: ホットスタートPCR のための統合そして適用。 関連の記事
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核酸Symp Ser (Oxf) 。2008;(52):259-60
著者: Koukhareva I 、Haoqiang H 、Yee J 、Shum J 、ポールN 、Hogrefe RI 、Lebedev AV
複数2'-deoxyribonucleoside 5' 三リン酸塩の3' エーテル及び3' エステルの派生物は(dNTPs) 準備された。これらのdNTP の派生物はDNA のポリメラーゼのための基質でなかったし、室温でプライマー延長を支えなかった。但し、PCR の緩衝のC 95 度のへの短い予備加熱によって、これらの3' 変更されたdNTPs は効率的にPCR の拡大を支える該当の非修飾自然なdNTPs に変えることができる。3' 変更されたdNTPs と得られたより高いamplicon の収穫に終ってPCR プロダクトの分析はPCR の性能の重要な改善を明らかにし、ターゲットプロダクトの形成を減らした(mis 起爆剤及びプライマー二量体) 。調査された3' 変更されたdNTPs 間で、3'-tetrahydrofuranyl 派生物は最もよい結果を示した。
PMID: 18776352 [ PubMed - プロセスの…]