そのままのPCR
そのままのPCRの定義
そのままのPCR (ISH)はスライドのセルの中で実際に起こるポリメラーゼの連鎖反応である。 そのままのPCRの拡大は固定ティッシュかセルで行うことができる。
そのままのPCRの紹介
病気の開始そして進行の間に、セルの小さい人口の製品のごく少量かティッシュは病気の病因のために重要かもしれない。
彼ら自身を臨床的に明示するように影響を受けたセル人口の大半がtranscriptionally作動しない状態にある、および示されていたことが月また更に年が要求する多くの遅展開の病気では宿主細胞ごとの1つの遺伝子のレベルで。
核酸の交配方法およびポリメラーゼの連鎖反応(PCR)は両方病因の間にそのような影響を受けた遺伝子の表現そして検出を検査するために用いられた。 これらの技術が両方ともかなり有用な間、これらの技術の不利な点は本質的にセル表現および人口調査を行なっていることである。 核酸は標準交配の技術によって直接検出するために分子の十分な番号を含んでいるまたは隔離されるセルの人口からsubpopulationが同様に少しを核酸の単一コピー、PCRによって増幅され、拡大の後で検出されるその分子含んでいるとき。
そのままの交配(ISH)は細胞レベルに核酸の交配の技術の方法を適用する。 cytochemistryおよびimmunocytochemistry、そのままのPCRを結合することは細胞マーカーの識別が識別されるようにしティッシュおよび血液サンプルのようなセル人口内のセル特定のシーケンスにの更にローカリゼーションを、可能にする。
そのままのPCRはRNA、遺伝子またはゲノムのようなnon-genomic材料の検出に検出限界がほとんどの場合セルごとのターゲット核酸の複数のコピーであるので、限定される。 従って、限定番号の限定、RNAの交配が原因でDNAの検出より敏感がある。
そのままのPCRの感度に影響を与える要因は下記のものを含んでいる:
1)ターゲット分子のstrandedness
2)ターゲットシーケンスに近位補足シーケンスの欠乏
逆によってtranscriptase触媒作用を及ぼされるそのままのトランスクリプションがRNAsを検出するのに使用されていた比較的高い限定番号に発生する。
そのままのPCR (ISH) Protcol
最初に核酸コンポーネントの化学量論はプライマー運転される反作用をする。 反作用がしかし進むと同時に、PCRの製品自体はそれ以上の延長のためのプライマーと同様、それ以上の拡大のためのターゲットとして、作用し始める。 多重反作用で延長される固定セルによって保たれ、検出段階のradiolabeledプローブのためのターゲットとして機能するシーケンスののは蓄積である。
固定セル内の複雑で物理的な性質は拡散と同様、ポリメラーゼの効率およびアニーリングを両方妨害し、こうして延長の時間は水様の(標準PCR)状態の下で行なわれるそれらより大いに長い。 最適シグナルは通常15微細な延長を使用してproducted。