反対のPCR
反対のPCR の 背景
反対のPCR はまたIPCR を呼び、Ochman 等によって1988 年(1) で最初に記述されていた。
標準的なPCR の限定は興味のあなたのDNA の片の5' 及び3' 並ぶ地域が知られていなければならないことである。反対のPCR は1 つの内部順序の情報を有するただときPCR を行なうことを可能にする。
反対のポリメラーゼの連鎖反応はターゲットDNA の1 つの内部順序しか知られていないときPCR の変形、使用される。従ってそれはgenomic 挿入物の並ぶDNA 順序の識別に非常に有用である。他のPCR 方法に類似した、反対のPCR はDNA のポリメラーゼを使用してターゲットDNA を増幅する。
反対のPCR は通常のオリエンテーションの反対方向でプライマーを方向づけてもらうどんなに、標準的なPCR (ポリメラーゼの連鎖反応) を使用する。逆のプライマーのための型板は円を形作るためにそれ自身にligated 制限の片である。
反対のPCR 方法
反対のPCR 方法は制限のendonuclease によって切られるDNA との一連の消化力そして自己self-ligations が含まれている。この切口は未知の順序のどちらかの終わりに知られていた順序で起因する。
反対のPCR は歩む
1) ターゲットDNA は制限のendonuclease
の消化力によって複数のkilobases のより小さい片に軽く切られる。
2) 自己self-ligation は改良する隣酸塩背骨は低い集中によりの下で引き起こされる。これは円のDNA のligation プロダクトを与える。
3) ターゲットDNA はそれから知られていたendonuclease と消化される制限である。これは知られていた末端順序の線形プロダクトを発生させる知られていた内部順序内の切口を発生させる。これはPCR (ポリメラーゼの連鎖反応) に今使用することができる。
4) 標準的なPCR は今知られていた内部順序に補足プライマーによって行なわれる。
概要:
知られていた順序を並べる順序をクローンとして作るために反対のPCR は作用する。円のDNA を発生させるために並ぶDNA 順序は消化され、次にligated 。
並ぶ順序を増幅するために知られていた順序から指すPCR のプライマーはそれから用いられる。
反対のPCR の適用
反対のPCR にtransposable 要素を並べる順序の拡大そして同一証明を含む分子生物学で多数の適用およびgenomic 挿入物の同一証明がある。
反対のPCR の議定書
反対のPCR の参照
1 。Ochman H 、Gerber ように、Hartl DL 。 遺伝学。 1988 Nov;120(3):621-3 。