PCRのプライマー
PCRのプライマーの定義:
PCRのプライマーは短いsingle-stranded、総合的に総合されたオリゴヌクレオチドの通常短いヌクレオチドより50 (頻繁に18-25のヌクレオチド)である。
PCRのプライマーのアプリケーション
PCRのプライマーは増幅する必要があるどれが興味のDNAのフラグメントの始めそして端に補足重要であるである。 従ってプライマーは領域の境界をPCRによって増幅されるために選ぶ。 PCRのアニーリングのサイクルの間に、PCRのプライマーはDNAの補足領域にアニールする。 oligoのDNAポリメラーゼの結合そして3つ'オハイオ州はDNAの統合が発生するようにする。
PCRのプライマーの選択
プライマーを選択した場合考慮するべき重要な要因:
- 最適Tm (アニーリングT)の~ 50-60°C
- オリゴヌクレオチドのGC内容は40-60%の間にあるべきである。
- 反作用で使用される両方のプライマーのための計算されたTm (溶ける温度)は>5°C.異なるべきではない。
- プライマーアニーリングの温度は通常計算されたより低いTmの下に5°Cである。 ただしそれは個々の条件のために経験的に選択されるべきである。
- >4と二量体>8の内部の自己補足のヘアピンは避けるべきである。
- 3 '終点は非常に大文字/小文字の区別がある-反作用で使用される他のプライマーのあらゆる領域に補足であり、テンプレートに一致する正しいベースを提供しなければならない。
- もし可能なら、プライマーは1-2 GまたはCの残余が付いている端開始し、
- プライマーにextendisveの二次構造か自己相補性があるべきではない(プライマー二量体で起因できる)。
PCRのプライマーデザイン
PCRのプライマーデザインの助けるプログラム:
Primer3
WebPrimer
それらを- PCRのプライマーデザイン・ツールここに見つけなさい。