PCR のプライマー
PCR のプライマーの定義:
PCR のプライマーは急に、総合的に総合されたオリゴヌクレオチド通常やがてより50 のヌクレオチド(頻繁に18-25 のヌクレオチド) 単一座礁する。
PCR のプライマーの適用
PCR のプライマーは1 つが増幅する必要がある興味のDNA の片の初めそして端に補足重要であるである。従ってプライマーは地域の境界をPCR によって増幅されるために選ぶ。PCR のアニーリング周期の間に、PCR のプライマーはDNA の補足の地域にアニールする。oligo のDNA のポリメラーゼの結合’ そして3 つオハイオ州はDNA の統合が起こるようにする。
選択のPCR のプライマー
選択のプライマー時考慮するべき重要な要因:
- 最適のTm (アニーリングt) の‾ 50-60.C
- オリゴヌクレオチドのGC 内容は40-60% の間にあるべきである。
- 反作用で使用される両方のプライマーのための計算されたTm (溶ける温度) は> 5.C 異なるべきでない。
- プライマーアニーリングの温度は計算されたより低いTm 以下5.C 通常である。但しそれは個々の条件のために経験的に選ばれるべきである。
- > 4 と二量体の内部の自己補足のヘアピンは> 8 避けるべきである。
- 3' terminus は敏感な場合非常にである- 反作用で使用される他のプライマーのあらゆる地域に補足であり、型板に一致する正しい基盤を提供しなければならない。
- 可能なら、プライマーは1-2 G またはC の残余が付いている端始まり、
- プライマーにextendisve の二次構造か自己相補性があるべきでない(プライマー二量体で起因するできる) 。
PCR のプライマー設計
PCR のプライマー設計の助けるプログラム:
Primer3
WebPrimer
それらを- PCR のプライマー デザイン・ツールここに見つけなさい。