식민지PCR
식민지PCR은 무엇 이는가?
식민지 PCR의 정의는 아래와 같는다:
식민지PCR은 정확한 결찰 또는 플라스미드 제품을 위해 세균성 (E.Coli) 또는 효모의 검열 복제한다. 박테리아의 선정된 식민지 또는 효모는 성장 (아g아r옷어) 격판덮개에서 메마른 이쑤시게 또는 피펫 끝에 쑤신다. 이것은PCR주인 혼합으로 그때 삽입되나 압력가마로 소독된 근해로 전 삽입된다. 식민지가 관심사의DNA파편 또는 플라스미드를 포함하면 결정하기 위하여PCR은 그때 지휘된다.
세균성E.Coli식민지PCR의정서
식민지PCR빠른Prep방법
단계 1:
압력가마로 소독한 이쑤시게 또는 피펫 끝에 세균성 식민지를 쑤시고 압력가마로 소독한microfuge관 μ안에TE에 의하여 압력가마로 소독되는dH2즁의25l으로 그것 소용돌이치십시요. 전체 식민지를 제거하고지 않, 너가preferrably수를 격판덮개 쑤신 지역을 표를 하십시요 (및microfuge관)의 바닥.
단계 2:
비등 목욕안에 혼합 또는 2 분을 위해
뜨거운 (90-100C) 난방 구획을 가열하십시요
단계 3:
2 분을 위해 회전급강하 견본 고속 분리기안에.
단계 4:
이동 μ새로운microfuge관으로 상청액의20l.
단계 5:
25 μlPCR표준PCR반응안에 템플렛으로 μ상청액의1-2l을 가지고 가십시요.
효모 식민지PCR의정서
37C부화기에서 성장한 포획 효모 세포는 (신선하게 성장한 효모 더 낫다) 신선했던 격판덮개에
압력가마로 소독한 이쑤시게 또는 피펫 끝을 가지고 가고 소량 효모 식민지를 만지십시요. 멀리 전체 식민지를 긁지 말라. 표준PCRmastermix으로 그것을 중단하십시요.
PCR순환 상태:
첫번째 변성시키는 단계: 95의 캜, 5 분
단계를 변성시킴: 95캜,30sec
어닐링 단계: 50-55캜,30sec
연장 단계: 72캜,1min/kb
단계 s2-4을 반복하십시요: 34번
마지막 연장: 72의캜, 3 분
1%아g아r옷어 젤의 위에 전체PCR반응을 적재하십시요.
식민지PCR은 - Pubmed은 연구를 간행했다
본래 박테리아 (식민지PCR)의 직접적인PCR. 관계있는 기사
본래 박테리아 (식민지PCR)의 직접적인PCR.
CurrProtocMicrobiol. 2008년May;Appendix3:Appendix3D
저자: Woodman나
이 의정서는 폴리메라이제 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 원한DNA순서의 존재를 위해 본래 박테리아를 가리기를 위해 능률적인 방법을 기술한다. 이 방법은 식민지PCR으로 일반적으로 알려진다.
PMID: 18770531[PubMed- 과정안에 -]