제자리 PCR
제자리 PCR의 정의
제자리 PCR (ISH)는 활주에 세포 안쪽에 실제로 일어나는 폴리메라이제 연쇄 반응이다. 제자리 PCR 확대는 조정 조직 또는 세포에 실행될 수 있다.
제자리 PCR 소개
질병의 개시 그리고 진행성 도중, 세포의 작은 인구에 있는 제품의 소량 또는 조직은 질병의 병인을 위해 생명 일지도 모른다.
임상으로 명시할 것을 달 또는 년이 요구하는 많은 느리 발전 질병에서는 영향 받은 세포 인구의 대다수가 transcriptionally 비활동성 국가에서 다는 것을, 호스트 세포 당 1개의 유전자의 수준에, 및 보였다.
핵산 교잡 방법과 폴리메라이제 연쇄 반응 (PCR)는 둘 다 병인 도중 그 같은 영향 받은 유전자의 표정 그리고 탐지를 검토하기 위하여 채택되었다. 양쪽 기술이 확실히 유용한 동안, 이 기술의 불리는 필수적으로 세포 표정과 인구 조사를 수행하고 있다 이다. 핵산은 표준 교잡 기술로 직접 검출하기 위하여 분자의 충분한 수를 포함하는 세포의 인구에서 부분 모집단이로 만큼 약간을 핵산의 단일 사본, PCR에 의해 증폭되고, 확대 후에 검출될 그 분자 포함할 때, 또는 고립된다.
제자리 교잡 (ISH)는 세포질 수준에 핵산 교잡 기술의 방법론을 적용한다. cytochemistry와 immunocytochemistry, 제자리 PCR를 결합하는 것은 세포질 마커의 ID가 확인되는 것을 더 허용하고, 조직과 혈액 샘플과 같은 세포 인구 내의 세포 특정 순서에의 지방화를 허용한다.
제자리 PCR는 RNA 유전자 또는 게놈과 같은 non-genomic 물자의 탐지로 탐지 한계가 대부분의 상황에서 세포 당 표적 핵산의 몇몇 사본이기 때문에, 제한된다. 그러므로, 사본 수 제한, RNA의 교잡 때문에 DNA 탐지 보다는 더 과민하다.
제자리 PCR 감도에 영향을 미치는 요인은 다음을 포함한다:
1) 표적 분자의 strandedness
2) 표적 순서에 인접하는 무료한 순서의 부족
리버스에 의하여 transcriptase 촉매 작용을 미친 제자리 녹음방송은 RNAs를 검출하기 위하여 이용하 조차 상대적으로 높은 사본 수에 생기는.
제자리 PCR (ISH) Protcol
초기에 핵산 분대의 화학량론은 뇌관 몬 반응을 만든다. 반응이 그러나 진행하는 때, PCR 제품 자체는 추가 신장을 위한 뇌관 뿐만 아니라 추가 확대를 위한 표적으로, 작용하는 것을 시작된다. 조정 세포에 의해 유지되고 탐지 단계에 있는 방사선 조사를 위한 표적으로 작동하는 다중 반응에서 길게한 순서의 축적이다.
조정 세포 내의 복잡한 물리적 성질은 유포 뿐만 아니라 폴리메라이제의 효율성 및 어닐링을 둘 다 방해하고, 이렇게 신장 시간은 수성 (표준 PCR) 상태 하에서 수행된 그들 보다는 매우 더 길다. 최적 신호는 일반적으로 15 작은 신장을 사용하여 producted.