반대 PCR
반대 PCR 배경
반대 PCR는 또한 IPCR를 부르고, Ochman에 의해 1988년 (1)에서 그 외 여러분 기술되었다 처음으로.
표준 PCR의 제한은 관심사의 DNA 파편의 5개 ' 그리고 3개의 ' 측면에 서는 지구가 알려져야 한다 이다. 반대 PCR는 단지 1개의 내부 순서의 정보가 있을 때 PCR를 수행하는 것을 허용한다.
반대 폴리메라이제 연쇄 반응은 표적 DNA의 단지 1개의 내부 순서만 알려질 때 PCR의 이체이고, 사용된다. 그러므로 genomic 삽입의 측면에 서는 DNA 순서 확인에 아주 유용하다. 다른 PCR 방법과 유사한, 반대 PCR는 DNA 폴리메라이제를 사용하여 표적 DNA를 증폭한다.
반대 PCR는 일반적인 오리엔테이션의 역 방향에서 뇌관을 동쪽으로 향하게 해 달라고 한다 그러나, 표준 PCR (폴리메라이제 연쇄 반응)를 사용한다. 반전 뇌관을 위한 템플렛은 원형을 형성하기 위하여 자체적으로에 잡아매진 금지 파편이다.
반대 PCR 방법
반대 PCR 방법은 금지 endonuclease로 잘리는 DNA를 가진 일련의 소화 그리고 각자 결찰을 포함한다. 이 커트는 불명한 순서의 어느 것이든 끝에 알려진 순서 귀착된다.
반대 PCR는 족답한다
1) 표적 DNA는 금지 endonuclease 소화로 몇몇 kilobases의 더 작은 파편으로 가볍게 잘린다.
2) 각자 결찰은 개혁하는 인산염 백본이 원인이 되는 낮은 농도의 밑에 유도된다. 이것은 원형 DNA 결찰 제품을 준다.
3) 표적 DNA는 그 때 알려진 endonuclease로 소화된 금지이다. 이것은 알려진 끝 순서를 가진 선형 제품을 생성하는 알려진 내부 순서 내의 커트를 생성한다. 이것은 지금 PCR (폴리메라이제 연쇄 반응)를 위해 사용될 수 있다.
4) 표준 PCR는 지금에 의하여 알려진 내부 순서에 무료한 뇌관으로 수행된다.
요약하자면:
반대 PCR는 알려진 순서를 측면에 서는 순서를 복제하기 위하여 작용한다. 측면에 서는 DNA 순서는 원형 DNA를 생성하기 위하여 소화되고 그 후에 잡아매진다.
알려진 순서에서 멀리 가르키는 PCR 뇌관은 그 때 측면에 서는 순서를 증폭하기 위하여 채택된다.
반대 PCR의 응용
반대 PCR에는 transposable 성분을 측면에 서는 순서의 확대 그리고 ID를 포함하여 분자 생물학에 있는 수많은 응용, 및 genomic 삽입의 ID가 있다.
반대 PCR 프로토콜
반대 PCR 참고
1. Ochman H, Gerber 것과 같이, Hartl DL. 유전학. 11월 1988일; 120 (3): 621-3.