PCR클로닝
클로닝PCR제품
너가 플라스미드 또는 구조물으로DNA의 파편을 복제하고 싶으면, 이것을 하는 가장 쉬운 방법의 한개은PCR을 사용하고 있다. 너는 플라스미드안에DNA파편 또는 유전자가 이미 있고, 파편을 측면에 서는 금지 위치가 너가 그것을으로 복제하고 싶는 새로운 플라스미드에 양립하면, 금지 효소 소화는 흔하게 잘 일한다.
그런데, 너가 파편을 위해 새로운 금지 위치를 설계하나, 삭제를 파편의 건설하나,DNA안에 위치를 변화시키고 싶으면,DNA파편의PCR또는 폴리메라이제 연쇄 반응은PCR을 사용하여 너의 파편을 복제하는 가장 쉬운 제일 방법의 한개 이다.
PCR클로닝을 위해 뇌관을 디자인한
PCR클로닝을 위해 뇌관은 흔하게 금지 위치를 추가하는 필요때문에 더 길다.
금지 위치는 흔하게 길이안에 6 bp 이다. 너가subclone에PCR제품 가지 않으면, 너는 금지 위치의 뉴클레오티드5'을 추가한것을 필요로 한다
이것은 금지 효소를에 묶, 능률적 이기 위하여 금지 위치를 자르는 둔다.
(뇌관 프로그램에의해 디자인되는) 간격 장치 금지 위치 뇌관 순서
3 bp --6bp--15-22bp
PCRSubcloning
너가 관심사의 너의 벡터로 그것을 삽입할 전에 (Subclone은 벡터로PCR제품을 복제한것을 의미한다. 이것의 이점은 너가 결코PCR너의 삽입 다시 하지 않는다 고 사실을, 너 항상 있어 냉장고안에 그것을 포함하, 최대한 너는 자랄 수 있어 너가 원하는 박테리아를 사용하는.)
우리의 경험에서,PCR은 제품을 자르는 흔하게 벡터에서 절단 파편보다는 매우 보다 적게 능률적 이다. 따라서, 자르는PCR제품 및 능률과 너가 말썽을 이것을 한 있을지도 모른다 너의 벡터로 그들을 복제함것은 직접적으로 있지 않을지도 모르지 않는다.
저것은subcloning벡터로subcloning방법 이다 흔하게 제일 이다.
TOPO벡터
비싸 수 있어도,TOPO벡터는subcloning을 위해 중대하다. 그들에 의하여 너를 시간 결국에는 저장하고, 클로닝PCR제품이 더 쉬운과 능률에게 한다.
이것을 위해 이유는 너가 쉽게 플라스미드안에DNA을 소화할 수 있는다 고 이다. 쉽게에 묶, 너의 조각을 소화하기 수 있기 때문에 그것은 금지 효소를 위해 능률적 이다.
불리는 너는 능률 적이고, 낙관한PCR상태가 있어야 한다 고 이다. 너의PCR안에 많을 악대의 존재는 그것에게 관심사의 너의PCR제품을 복제하게 곤란할 그렇지 않으면 불가능할 것이 만들l 것이다.
너는 흔하게subclone대략 2 일안에 너의PCR제품 할 수 있는다. 결찰은 단 5 분을 걸리고 너는 너의 세균성 식민지를 결찰의 일 도금할 수 있는다. 너에 의하여 식민지를 다음날에 쑤시고 매체안에 성장하면 하자마자, 너는 뿐만 아니라 너의 삽입, 너를 또한 지금 있는다 너의의 세균성 식민지를subcloned너가 수년간 액체 질소로 글리세롤에 얼l 수 있는 삽입을 증폭한다.
너가 너의 삽입에 다른 구조물을 만들l것을 필요로 할 때 이것은 진짜로!