PCR Limitations and Disadvantages pcr 제한과 단점
The High Sensitivity of PCR pcr의 높은 민감도
Due to the extremely high sensitivity of PCR, contamination from non-template PCR present in the lab environment (from bacteria, viruses, and your own DNA) presents a real problem. PCR 실험실 환경에서 박테리아, 바이러스 (자신의 DNA)에서 현재 템플릿 PCR, 비 오염의 매우 높은 감도로 인해 - 진짜 문제는 선물. Precautions therefore must be taken. 따라서 예방 조치가 취해 져야한다. Several steps can be taken to prevent and minimize PCR contamination including the use of aerosol barrier tip filters, laminar flow cabinet, and a special preparation area for PCR separate from the DNA isolation area. 여러 단계의 예방 및 에어로졸 장벽 팁 필터의 사용을 포함한 PCR 오염을 최소화하고, 엷은 층을 이루는 흐름 캐비닛, 그리고 PCR의 DNA 고립 지역에서 별도의 영역에 대한 특별한 준비를 취할 수있습니다.
Polymerase Errors 효소 오류
DNA polymerase are not perfect by any means, however they are quite good at what they do. 어떤 수단에 의해 DNA가 효소 그러나 그들이하는 짓을 잘하는 사람들이 꽤 완벽하지 않다. Mistakes and errors do happen in PCR by DNA polymerases in the test tube and in the human body. 실수와 오류를 PCR에서 DNA에 의해 일어나지 않는 시험관에서 인간의 몸은 polymerases하고있다. The polymerases used in PCR often lack 3' to 5' exonuclease activity such as Taq polymerase. 이 PCR에 자주 DNA 형성 촉매 효소 등 3 '로 5'exonuclease 활동이 부족 사용 polymerases. This enzyme lacks the ability to correct misincorporated nucleotides, an activity which is present in higher eukaryotes. 이 효소 활동은 높은 eukaryotes에 존재하는 세포핵 misincorporated를 해결하는 능력이 부족하다.
A polymerase lacking the 3' to 5' exonuclease activity has a higher error rate, around 1 in 10000 bases are misincorporated. 한 효소 3 '로 5'exonuclease 활동 부족, 1 약 10000 기지에서 misincorporated하는 높은 오류율있다.
Recombinant polymerases have been generated and other polymerases have been isolated which are available to more accurate PCR and have a variety of applications such as sequencing. 재조합 polymerases 생성되고 다른 polymerases는보다 정확한 PCR을 사용할 수있습니다 고립되어 있고, 그러한 순서로 애플 리케이션의 다양한 필요합니다.
Examples of polymerases with 3' to 5' exonuclease activity include: Vent, which is extracted from Thermococcus litoralis , Pfu which is extracted from Pyrococcus furiosus, and Pwo which is extracted from Pyrococcus woesii . 3 '을 5'exonuclease 활동 polymerases의 예로는 :, Thermococcus litoralis, Pfu는 Pyrococcus furiosus에서 추출한이며, Pwo는 Pyrococcus woesii에서 추출한에서 통풍이 추출됩니다.
PCR Polymerase Enzyme Proficiency and PCR Product Size / Length Limitations pcr 효소 효소 능력과 pcr 제품 크기 / 길이의 한계
DNA polymerase are proficient enough to efficiently amplify DNA products up to a few thousand basepairs (2-5 kb). 효소 DNA를 충분히 효율적으로 최대 몇 천 basepairs (2-5킬로바이트) DNA를 제품에 대한 전문 지식을 증폭하고있다. PCRs of longer products are less efficient due to enzyme activity loss, and inaccuracies introduced by longer PCRs. 더 이상 제품의 덜 PCRs 인한 손실이 효소의 활동을 효율적이고 부정확 이상 PCRs으로 도입했다. Adding fresh DNA polymerase helps with enzyme activity lost due to the half life of the polymerase, however this does not help when accurate PCR is required. 신선한 DNA를 효소 효소의 활동과 함께 추가 도움이 효소의 절반으로 인해 삶 그러나 정확한 PCR이 필요합니다 잃었을 때 도움이되지 않습니다.
It is possible to amplify PCR products up to 20kb using lower or slower heating cycles and special mixtures of polymerases. 그걸 이십킬로바이트을 낮추거나 느린 polymerases의 특수 혼합물을 사용하여 가열 사이클과 PCR 증폭 가능한 제품이다. Long and Accurate PCR is accomplished by using mixtures of processive polymerases and high fidelity Polymerases. 오래하고 정확한 PCR processive polymerases과 높은 충실도 Polymerases의 혼합물을 사용하여 수행됩니다.