PCR 뇌관
PCR 뇌관의 정의:
PCR 뇌관은 짧은 single-stranded, 합성으로 종합한 oligonucleotides 일반적으로 더 짧은 뉴클레오티드 50 (수시로 18-25의 뉴클레오티드)이다.
PCR 뇌관의 응용
PCR 뇌관은 증폭할 필요가 있다 어느 것이 관심사의 DNA 파편의 처음 그리고 끝에 무료하더라도 중요하더라도. 뇌관은 그러므로 지구의 경계를 PCR에 의해 증폭되기 위하여 선정한다. PCR 어닐링 주기 도중, PCR 뇌관은 DNA의 무료한 지구에 단련한다. oligo의 DNA 폴리메라이제 바인딩 그리고 3개 ' OH는 DNA의 종합이 생기는 것을 허용한다.
PCR 뇌관 선택
뇌관을 선택할 경우 고려할 것이다 중요한 요인:
- 최적 Tm (어닐링 T) ~ 50-60°C
- Oligonucleotide GC 내용은 40-60% 사이에서 있어야 한다.
- 반응에서 사용된 두 뇌관 전부를 위한 산출한 Tm (녹는 온도)는 >5°C. 다르면 안된다.
- 뇌관 어닐링 온도는 일반적으로 산출한 더 낮은 Tm의 밑에 5°C이다. 그러나 그것은 개별적인 조건을 위해 실험적으로 선택되어야 한다.
- >4와 이합체 >8의 안 각자 무료한 동곳은 피해야 한다.
- 3 ' terminus는 극단적으로 대소문자에 민감하다 - 반응에서 사용된 다른 뇌관의 어떤 지구도에 무료하다 템플렛에 일치하는 정확한 기초를 제공해야 한다.
- 만약에 가능하다면, 뇌관은 1-2 G 또는 C 잔류물을 가진 끝 시작해야
- 뇌관에는 어떤 extendisve 이차 구조 또는 각자 상보성든지 있으면 안된다 (뇌관 이합체 귀착될 수 있다).
PCR 뇌관 디자인
PCR 뇌관 디자인에서 지원하는 프로그램:
Primer3
WebPrimer
그(것)들을 - PCR 뇌관 설계 도구 여기에서 찾아내십시오.