PCR 분쟁 해결

PCR 문제와 해결책 의 PCR 도움

PCR 문제는인 무엇?:

문제:

agarose 젤을 달릴 경우 적당한 크기가 아닌 더 큰 일반적인 PCR 악대를 더럽힌다.

PCR에 있는 긴 일반적인 제품에 해결책:

감소 어닐링 시간

감소 연장 시간

62-68º C에 감소 연장 온도

1.2x-2x에 증가 KCl (버퍼) 농도, 그러나 1.5-2mM에 보유 MgCl2 농도

증가 MgCl2 농도 3-4.5 까지 mM 그러나 보유 dNTP 농도 불변의 것.

더 적은 뇌관을 사용하십시오

더 적은 DNA 템플렛을 취하십시오

Taq 더 적은 폴리메라이제를 취하십시오

만일 위 일의 아무도: 뇌관을 반복적인 순서를 (돌풍은 데이타베이스를 순서를 맞춘다) 검사하고 뇌관을 바꾸십시오

몇몇의 조합 또는 위 전부.

문제:

agarose 젤을 달릴 경우, 몇몇 아주 작은 PCR 악대를 더럽힌다. 이들은 뇌관의 또는 두 뇌관 전부의 크기에 대한 크기이다 (A 및 함께 B). 이들은 "뇌관 이합체이라고" 불리고 자체적으로 가진 또는 다른 뇌관을 가진 뇌관의 어닐링에 의해 형성된다.

PCR에 있는 뇌관 이합체에 해결책:

더 적은 뇌관을 사용하십시오.

재설계 뇌관은 새로운 배치를 주문한다. 뇌관이 무료한 순서의 큰 백분율을 공유하지 않는다 각자 어닐링을 위한 사용 뇌관 디자인 소프트웨어 그리고 검사 확인하거든. OligoAnalyzer와 직립원인 이합체와 hetero 이합체 대형을 뇌관을 주의깊게 검사하십시오

프롬아미드 유무 PCR를 수행하십시오.

Mg2+ (MgCl - 1.5, 2.0, 2.5 그리고 3.0 mM) 농도를 적정하십시오.

DNA 템플렛 총계 (농도)를 증가시키십시오.

어닐링 온도 (어닐링을 위한 최적 온도를 찾아내기 위하여 기온변화도 PCR 기계를 사용하는 낙관하는 시험)를 증가시키십시오.

5%까지 DMSO를 추가하는 시도하십시오.

정규 Taq 폴리메라이제 PCR 대신에 HotStart PCR를 사용하는 시도하십시오.

몇몇의 조합 또는 위 전부.