PCR분쟁 해결

PCR문제와 해결책 의PCR도움

너의PCR문제는 이는 무엇?:

문제:

아g아r옷어 젤을 달릴 경우 너는 우측 크기가 아닌 더 큰 일반적인PCR악대를 더럽힌다.

PCR안에 긴 일반적인 제품에 해결책:

감소 어닐링 시간

감소 연장 시간

62-68C에 감소 연장º 온도

1.2x-2x에 증가KCl(완충기) 농도, 그러나1.5-2mM에 보유MgCl2농도

증가MgCl2농도 종사하고3-4.5밀리미터 그러나 보유dNTP농도 불변의 것.

더 적은 뇌관을 사용하십시요

더 적은DNA템플렛을 가지고 가십시요

Taq더 적은 폴리메라이제를 가지고 가십시요

상기 일의 아무도: 뇌관을 반복적인 순서를 (돌풍은 데이타베이스에 순서를 맞춘다) 검사하고primer(s)을 변화하십시요

상기의some/all의 조합.

문제:

아g아r옷어 젤을 달릴 경우, 너는 몇몇 아주 작은PCR악대를 더럽힌다. 함께의 이들은 너의 뇌관의 또는 양쪽 너의 뇌관의 크기에 관하여 크기 이다 (A그리고b). 이들은 "뇌관 이합체이라고" 부르고 자체적으로 또는 다른 뇌관에 너의 뇌관의 어닐링에의해 형성한다.

PCR안에 뇌관 이합체에 해결책:

더 적은 뇌관을 사용하십시요.

재설계 뇌관은 새로운 배치를 주문하고. 뇌관이 무료한 순서의 큰 백분율을 나누지 않는다 고 너는 각자 어닐링을 위해 사용 뇌관 디자인 소프트웨어 그리고 체크 확인하고. 주의깊의 체크 뇌관OligoAnalyzer에 직립원인 이합체와hetero이합체 대형을 위해

프롬아미드에 그리고없이 행위PCR.

Mg2+(MgCl-1.5,2.0,2.5그리고3.0밀리미터) 농도를 적정하십시요.

DNA템플렛 총계 (농도)을 증가하십시요.

어닐링 온도 (어닐링을 위해 발견 최선 온도에 기온변화도PCR기계을 사용하여 낙관하는 시험)을 증가하십시요.

5%까지DMSO을 추가한 해보십시요.

Taq일정한 폴리메라이제PCR의 대신에HotStartPCR을 사용한 해보십시요.

상기의some/all의 조합.