RT-PCR
녹음방송 폴리메라이제 연쇄 반응을 반전하십시요
반전 녹음방송 폴리메라이제 연쇄 반응 (RT-PCR)은 폴리메라이제 연쇄 반응 (PCR)에 기초를 둔다. 더 중요하게 그것은 반전이DNA으로RNA을 베끼고retroviruses에서 처음에 고립시킨 반전 녹음방송의 과정에 기초를 둔다.
RT-PCR의 기술은 무료한에서DNA(사본DNA)의 대형을 핵산의 안정되어 있는 모양안에RNA의 순서를 (메신저RNA,mRNA) 저장하는RNA,DNA허용한다. 그것의 반전 보충DNA(DNA)으로RNA에서 이 반전 녹음방송은RT-PCR의 흔하게 2 단계 과정의 첫걸음 이다. 게다가,DNA으로RNA을 베껴서, 것개은 명확한DNA순서를 위해 뇌관을 사용해서 그때DNA순서를 증폭할 수 있는다. 이 확대는RT-PCR의 2 단계 과정의 마지막 제 2 중요한 단계 이다.
RT-PCR의 과정
RT-PCR의 첫걸음은 를 대로 "첫번째 물가 반응" 가리킨다. 많은dTs행위untranslated지구 -dNTPs, 첫번째 물가 반응안에, 무료한DNA또한 부른DNA은oligodT (3에 뇌관과 묶는 것에'유사한 올이g온읒러XX이d어 가장 큰mRNAs안에 출석하는3'UTR에 위치하는polyA순서)을 사용하여 관심사의 메신저RNA템플렛에게서, 하고, 반전 녹음방송의 과정으로transcriptase이 RNA 의존하는DNA폴리메라이제에 의하여, 반전한다.
이 요인은37캜에 1 시간을 위해 반전transcriptase완충기안에 결합된다. 반전transcriptase반응이 완전해던,DNA이 종합되었다 후에, RNADNA잡종에서RNA을 멀리 소화하는RNaseH은 추가된다 (RNA소화 효소). RNaseH에 외피다음에, 표준PCR또는 폴리메라이제 연쇄 반응은 관심사의 순서를 위해 명확한DNAoligo뇌관을 사용하여 지휘된다. 이 제 2 단계는 "제 2 물가 반응"으로 알려진다.
따라서thermostableDNA폴리메라이제를, 업스트림과 다운스트림DNA뇌관은 추가해서, 단순한 배가 좌초한DNA배가 좌초하는 두 배가 되 그것의 무료한DNA을 증폭해서 증폭해, 동등한 희소하나 낮은 사본mRNA순서의 탐지를 허용한.
RT-PCR의 신청
mRNA의 무료한 순서의 지수 확대 또는 반전 녹음방송 폴리메라이제 연쇄 반응경유RNA순서는 곳에 낮은 사본 수 또는 보다 적게 풍부한RNA분자가 검출될 수 있는 높은 감도 탐지 기술 고려한다. 무료한DNA의 모양으로mRNA순서를 복제하기 위하여 그것은 또한 이용해, 창조되는 세포안에 내색되는 유전자의 모든mRNA순서를 포함하는DNA(DNA도서관)의 도서관을 허용한. 게다가, 그것은RT-PCR에의해 복제하고 더 학문을 위해RNA과 단백질 수준에 유전자의 표정을 허용하는DNA구조물의 창조를 허용한다.