PCR Troubleshooting
PCR Problems quod Solutio, PCR Succurro
Quis est vestri PCR forsit?:
Forsit:
porro Non- Imprimis Uber in PCR
Ut cursor an agarose gel vos macula amplus non- imprimis PCR manus manus ut es non vox amplitudo.
Solutio desidero Non- imprimis Uber in PCR:
Minutum annealing vicis
Minutum tractus vicis
Minutum tractus siccus ut 62-68º C
Proventus KCl ( plaga) incumbo ut 1.2x-2x, tamen servo MgCl2 incumbo procul 1.5-2mM
Proventus MgCl2 incumbo usque 3-4.5 mM tamen servo dNTP incumbo jugis.
Utor minor primer
Take minor DNA templum
Take minor Taq polymerase
Si nullus of supremus officina: reprehendo primer pro repetitio series ( flatus align series per databases) quod change primers()
Iunctura of nonnullus/ totus of supremus.
Forsit:
PCR Primer Dimers
Ut cursor an agarose gel, vos macula nonnullus pusillus PCR manus manus. Illa es amplitudo of vestri primer vel super amplitudo of utriusque vestri primers (A quod B) una. Illa es termed "primer dimers" quod es quondam per annealing of vestri primer per ipsum vel per ceterus primer.
Solutio ut primer dimers in PCR:
Utor minor primer.
Re- intentio primer quod ordo a novus batch. Planto certus vos utor primer intentio software quod reprehendo pro ego-annealing quod ut primers operor non partis a amplus percentage of complementary series. Reprehendo primers dilgenter pro homo-dimer quod hetero-dimer formation per OligoAnalyzer
Se gero PCR per quod vacuus formamide.
Titrate Mg2+ (MgCl 1.5, 2.0, 2.5 quod 3.0 mM) incumbo.
Proventus DNA templum amount ( incumbo).
Proventus annealing siccus ( tendo optimizing usura a gradient PCR apparatus ut reperio bene siccus pro annealing).
Tendo consummatio DMSO usque 5%.
Tendo usura HotStart PCR instead of ordinarius Taq polymerase PCR.
Iunctura of nonnullus/ totus of supremus.