PCR Clónico
Clónico PCR Productos
Si usted necesidad a clon un fragmento de DNA a un plasma o construir, un de la fácilmente caminos hacer éste es usando PCR. Si usted haber el DNA fragmento o gene ya en un plasma, y el restricción sitios costado el fragmento está compatible con el nuevo plasma usted necesidad a clon él a, restricción enzima digestión usualmente obras pozo.
However, si usted necesidad a ingeniera nuevo restricción sitios por lo fragmento, construir borraduras de la fragmento, o mutación sitios adentro el DNA, PCR o polymerase reacción en cadena de DNA fragmento es un de la fácilmente y mejor caminos a clon su fragmento usando PCR.
Diseño Cartilla por PCR Clónico
Cartilla por PCR clónico está usualmente longevidad a causa de la necesidad a agregar restricción sitios.
Restricción sitios está usualmente 6 bp en duración. Si usted está no va a subclone el PCR producto, usted necesidad a agregar nucleotides 5' de la restricción sitio
Esto permitir el restricción enzima a atar a y corte el restricción sitio ser más eficiente.
Espacio Restricción sitio Cartilla Secuencia ( decorador por cartilla programa)
3 bp -6bp—15-22 bp
PCR Subcloning
(Subclone recursos a clon el PCR producto a un vector ante usted insertar él a su vector de interés. Ventajas de este contener el hecho de que usted nunca deber PCR su insertar de nuevo, usted testamento siempre haber él en el refrigerador, y usted lata crecer tanto como usted necesidad usando bacteria)
Desde nuestro experiencia, corte PCR productos es usualmente mucho menos eficiente de corte añicos levantado vectores. Así, corte PCR productos y clónico ellas a su vector directamente mayo no estar aquel eficiente y usted mayo haber problema haciendo esto.
O sea camino subcloning a un subcloning vector es usualmente mejor.
TOPO Vectores
TOPO vectores está gran por subcloning, aunque ellos lata estar cara. Serán guardar usted tiempo con el tiempo, y hacer clónico PCR productos fácilmente y más eficiente.
La razón para este es aquel usted lata fácilmente digerido DNA en un plasma. Está más eficiente por lo restricción enzima como puede fácilmente atar a y digerido su pieza.
Disadvantages está aquel usted mosto haber eficiente y optimizar PCR condiciones. El presencia de mucho bandas en su PCR testamento hacer él difícil si no imposible a clon su PCR producto de interés.
Usted lata usualmente subclone su PCR producto adentro acerca de 2 días. Ligadura ingresos único 5 minutos y usted lata placa su bacteriano colonias el día de la ligadura. Una vez usted pico colonias al día siguiente y crecer ellas en medios, usted no solo amplificar su insertar, usted también ahora haber un bacteriano colonia de su subcloned insertar cuál usted lata congelación con glicerol a el nitrógeno líquido por años.
Esto en realidad ayuda cuándo usted necesidad hacer otro construir con su insertar!