Pcr van de kolonie
Wat is PCR van de Kolonie?
De definitie van PCR van de Kolonie is:
Pcr van de kolonie het onderzoek van bacterieel (E.Coli) of gist kloont voor correcte afbinding of plasmideproducten. De geselecteerde kolonies van bacteriën of de gist worden geplukt met een steriel toothpick of pipetuiteinde van een de groei (agarose) plaat. Dit wordt dan opgenomen in de PCR hoofdmengeling of in gesteriliseerd met autoclaaf water pre-opgenomen. Pcr wordt dan geleid om te bepalen als de kolonie het fragment van DNA of de plasmide van belang bevat.
Bacterieel PCR van de Kolonie E.Coli Protocol
Pcr van de kolonie Snelle Prep Methode
Stap 1:
Pluk een bacteriële kolonie met gesteriliseerd met autoclaaf toothpick of pipette uiteinde en wervel het in 25 μl van TE gesteriliseerde met autoclaaf dH2O in een gesteriliseerde met autoclaaf microfuge buis. Verwijder niet de volledige kolonie, en merk het gebied u preferrably aantal de bodem van de plaat plukte (en de microfugebuis).
Stap 2:
Verwarm de mengeling in een kokend badwater of heet
(90-100C) het verwarmen blok 2 minuten
Stap 3:
De steekproef van de rotatie voor 2 minuten hoge snelheid in centrifuge.
Stap 4:
Overdracht 20 μl van de bovendrijvende substantie in een nieuwe microfugebuis.
Stap 5:
Neem 1-2 μl van de bovendrijvende substantie als malplaatje in een 25 μlpcr standaardpcr reactie.
Pcr van de Kolonie van de gist Protocol
Neem gistcellen die op een plaat vers van de incubator werden gekweekt 37C (is de vers gekweekte gist beter)
Neem gesteriliseerd met autoclaaf toothpick of pipette uiteinde en raak de een weinig gistkolonie. Schaaf weg geen gehele kolonie. Schort het in standaardpcr op mastermix.
Pcr het Cirkelen Voorwaarden:
Eerste het Denatureren Stap: 95 °C, 5 min
Het denatureren Stap: 95 °C, 30 seconden
Onthardende Stap: 50-55 °C, 30 seconden
De Stap van de uitbreiding: 72 °C, 1min/kb
Herhaal Staps 2-4: 34 Keer
Definitieve Uitbreiding: 72 °C, 3 min
Laad de volledige PCR reactie op 1% agarose gel.
Pcr van de kolonie - Pubmed Gepubliceerd Onderzoek
Directe PCR van intacte bacteriën (koloniepcr). Verwante Artikelen
Directe PCR van intacte bacteriën (koloniepcr).
Microbiol. 2008 3D May;Appendix 3:Appendix van Protoc van Curr
Auteurs: Woodman ME
Dit protocol beschrijft een efficiënte methode om intacte bacteriën voor de aanwezigheid van de gewenste opeenvolgingen van DNA te onderzoeken gebruikend polymerasekettingreactie (PCR). Deze methode wordt algemeen bedoeld als koloniepcr.
PMID: 18770531 [ PubMed - in proces ]