Conditions and Factors Affecting PCR De voorwaarden en factoren die van invloed PCR
Factors Affecting PCR: Factoren die van invloed zijn PCR:
PCR Reaction Volume PCR reactie volume
If you are increasing the PCR reaction volume proportionally to a PCR reaction that is optimized or works well, in general you will increase the amount of product with increasing volume. Als u het verhogen van de PCR-volume naar rato van een PCR-reactie die is geoptimaliseerd of goed functioneert, in het algemeen, verhoogt u de hoeveelheid producten die met toenemende volume. Exceptions to this include older mineral oil PCR machines and PCR thermocyclers without a heated-lid. Uitzonderingen op deze minerale olie ook oudere machines PCR en PCR thermocyclers zonder een verwarmde-deksel. In these cases, increasing the PCR reaction volume will negatively affect the PCR product and efficiency of the reaction. In deze gevallen, het verhogen van de PCR-volume zal negatieve gevolgen hebben voor de PCR-product en de efficiëntie van de reactie.
PCR Primer Design PCR primer Design
Primer are usually chosen to be between 18-25 nucleotides in length. Primer zijn meestal gekozen worden tussen 18-25 nucleotiden in lengte. Longer primers also work 30-40 nucleotides or bp during pcr Langer werken ook primers 30-40 nucleotiden of bp tijdens pcr
A GC clamp at the 5' ends of the primers helps. Een GC klem op de 5 'uiteinden van de primers helpt.
One can thus design primers with 1 or 2 nucleotides GC at the start and ends of the primers if possible Men kan dus het ontwerp van primers met 1 of 2 nucleotiden GC op de begin-en eindpunten van de primers indien mogelijk