Pcr Inleidingen
Definitie van een PCR Inleiding:
Pcr de Inleidingen zijn korte single-stranded, synthetisch samengestelde oligonucleotides gewoonlijk korter dan 50 nucleotiden (vaak 18-25 nucleotiden).
Toepassingen van PCR Inleidingen
Pcr de inleidingen zijn belangrijk aangezien zij aan het begin en het eind van het fragment van DNA van belang complementair zijn dat men moet vergroten. De inleidingen selecteren daarom de grenzen van het gebied dat door PCR moet worden vergroot. Tijdens de PCR onthardende cyclus, PCR ontharden de inleidingen aan het bijkomende gebied van DNA. De de polymeraseband en 3 OH’ van DNA van oligo staan de synthese van DNA toe om voor te komen.
Het kiezen van PCR Inleidingen
Belangrijke Te overwegen Factoren wanneer het Kiezen van Inleidingen:
- Optimale Tm (het ontharden T) ~ 50-60°C
- Oligonucleotide de gc-Inhoud zou tussen 40-60% moeten zijn.
- Berekende Tm (het smelten temperatuur) zou voor beide inleidingen die in reactie worden gebruikt niet moeten verschillen > 5°C.
- Is de onthardende temperatuur van de inleiding gewoonlijk 5°C onder berekende lagere Tm. Nochtans zou het empirisch voor individuele voorwaarden moeten worden gekozen.
- De binnen zelf-bijkomende haarspelden van > 4 en van dimeer zouden > 8 moeten worden vermeden.
- 3 het ' eindpunt is uiterst gevoelig geval - het moet niet aan om het even welk gebied van de andere inleiding complementair zijn die in de reactie wordt gebruikt en moet correcte basis verstrekken die aan malplaatje aanpast.
- Als mogelijk, zouden de inleidingen met 1-2 residu's van G moeten beginnen en beëindigen of van C
- De inleidingen zouden Geen extendisve secundaire structuur of zelf-complementariteit (kan in inleiding-Dimeer resulteren) moeten hebben.
Pcr het Ontwerp van de Inleiding
Programma's om u in PCR het Ontwerp van de Inleiding bij te staan:
Primer3
WebPrimer
Vind hen hier - PCR de Hulpmiddelen van het Ontwerp van de Inleiding.