Pcr het Problemen oplossen
Pcr Problemen en Oplossingen, PCR Hulp
Wat uw PCR probleem? is:
Lange Niet-specifieke PCR producten?
De vorming van het Dimeer van de inleiding?
Probleem:
Lange Niet-specifieke Producten in PCR
Wanneer het runnen van een agarose gel bevlekt u grotere niet-specifieke PCR banden die niet de juiste grootte zijn.
Oplossingen voor Lange Niet-specifieke Producten in PCR:
De onthardende tijd van de daling
De uitbreidingstijd van de daling
De uitbreidingstemperatuur van de daling aan 62-68º C
Van de verhoging KCl (buffer) de concentratie aan 1.2x-2x, maar houdt concentratie MgCl2 bij 1.52mM
De concentratie van de verhoging MgCl2 tot 3-4,5 mM maar houdt dNTP concentratieconstante.
Gebruik minder inleiding
Neem minder malplaatje van DNA
Neem minder polymerase Taq
Als geen van de bovengenoemde werkzaamheden: controleer de inleiding herhaalde opeenvolgingen (de ONTPLOFFING richt de opeenvolging op de gegevensbestanden) en verander de inleiding (s)
Combinatie van wat/elk van bovengenoemd.
Probleem:
Pcr de Dimeer van de Inleiding
Wanneer het runnen van een agarose gel, bevlekt u sommige zeer kleine PCR banden. Dit zijn de grootte van uw inleiding of over de grootte van beide inleidingen (A en B) samen. Deze worden genoemd "inleidingsdimeer" en door van uw inleiding met zich of met de andere inleiding te ontharden gevormd.
Oplossingen voor inleidingsdimeer in PCR:
Gebruik minder inleiding.
De inleiding van het herontwerp en geeft opdracht tot een nieuwe partij. Zorg ervoor u de software en de controle van het inleidingsontwerp voor zelf-onthardt gebruikt en dat de inleidingen geen groot percentage van bijkomende opeenvolging delen. Controleer zorgvuldig inleidingen homo-dimeer en hetero-dimeer vorming met OligoAnalyzer
Leid PCR met en zonder formamide.
Titreer Mg2 + (MgCl - 1,5, 2,0, 2,5 en 3,0 mM) concentratie.
Verhoog het malplaatjebedrag van DNA (concentratie).
Verhoog onthardende temperatuur (poging die gebruikend een gradiëntpcr machine om optimale temperatuur te vinden voor het ontharden optimaliseert).
Probeer toevoegend DMSO tot 5%.
Probeer gebruikend PCR HotStart in plaats van regelmatige Taq polymerasepcr.
Combinatie van wat/elk van bovengenoemd.