PCR in real time
ECHT - PCR VAN DE TIJD: Een inleiding
Hoewel de traditionele methodes om mRNA te kwantificeren zoals het noordelijke bevlekken en kruising in situ vrij goed zijn, naderen zij niet het gemak en de snelheid van Echt - tijdPCR.
Rechts-PCR of omgekeerde transcriptasePCR moet semi-kwantitatieve steekproeven op een gel en de ongevoeligheid van ethidium bromide moeten laden. Aldus, echt - tijdPCR werd uit de behoefte ontwikkeld om verschillen in mRNA uitdrukking op een gemakkelijke en snelle manier te kwantificeren, en wegens de behoefte om van kleine hoeveelheden mRNA zoals die te gebruiken verkregen door kleine weefselsteekproeven, en LCM (de laser vangt microdissection) isoleerde cellen.
Omgekeerd-transcriptase (rechts) PCR in real time is verschillend van andere kwantitatieve PCR aangezien het het aanvankelijke bedrag van het malplaatje in plaats van het ontdekken van de hoeveelheid definitief vergroot product kwantificeert (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
Echt - tijdPCR wordt gekenmerkt door het punt op tijd tijdens het cirkelen wanneer de versterking van het PCR product van belang eerst eerder dan het bedrag van het PCR product van belang wordt ontdekt dat bij het eindpunt na PCR wordt geaccumuleerd die een groot aantal cycli bevatte. Echt - tijdPCR doet dit door de hoeveelheid fluorescentie te controleren die tijdens de PCR reactie wordt uitgezonden, en dit doet dienst als indicator van de hoeveelheid PCR versterking die tijdens elke PCR cyclus voorkomt. Aldus, in nieuwere Echt - tijdPCR de machines, kunnen de vooruitgang van de reactie in „echt visueel zien - tijd“.
Echt - tijdPCR heeft ook een veel bredere dynamische waaier van zelfs 107 vouwen (in vergelijking met 1000 vouwen in conventionele rechts-PCR). De dynamische waaier van een analyse bepaalt hoeveel de doelconcentratie kan variëren en toch nog gekwantificeerd. Deze brede dynamische waaier resulteert ook in een nauwkeurigere kwantificatie.