Conditions and Factors Affecting PCR Condições e factores que afectam a PCR
Factors Affecting PCR: Factores que afectam a PCR:
PCR Reaction Volume PCR volume
If you are increasing the PCR reaction volume proportionally to a PCR reaction that is optimized or works well, in general you will increase the amount of product with increasing volume. Se você está aumentando o volume proporcionalmente à reação de PCR uma reação de PCR que é otimizado ou funciona bem, em geral, você vai aumentar a quantidade de produto com volume crescente. Exceptions to this include older mineral oil PCR machines and PCR thermocyclers without a heated-lid. Exceções a essa incluem óleo mineral mais velhas máquinas de PCR e PCR-thermocyclers sem uma tampa aquecida. In these cases, increasing the PCR reaction volume will negatively affect the PCR product and efficiency of the reaction. Nestes casos, o aumento do volume reação de PCR irá afetar negativamente o produto da PCR e da eficiência da reação.
PCR Primer Design PCR Primer design
Primer are usually chosen to be between 18-25 nucleotides in length. Geralmente são Primer a ser escolhido entre 18-25 nucleotídeos de comprimento. Longer primers also work 30-40 nucleotides or bp during pcr Primers também já trabalham ou bp 30-40 nucleótidos durante a PCR
A GC clamp at the 5' ends of the primers helps. Um grampo no GC 5 'extremidades dos primers ajuda.
One can thus design primers with 1 or 2 nucleotides GC at the start and ends of the primers if possible Pode-se, assim, design primers com 1 ou 2 nucleotídeos GC, e termina no início dos primers se possível