Começo Quente PCR - Reação Chain Do Polymerase De
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Começo Quente PCR: Uma Introdução
O começo quente PCR permite a inibição da atividade do polymerase durante a preparação da reação de PCR. Limitando a atividade do polymerase antes de PCR que dá um ciclo, o começo quente PCR reduz o amplification non-specific e aumenta o rendimento de alvo do produto de PCR.
O começo quente PCR é executado geralmente usando modificações, métodos da encer-barreira, e inibição químicos incluídos por um antibody taq-dirigido.
PCR ou a reação chain do polymerase usam os polymerases que foram isolados dos organismos thermostable tais como o enzyme de Taq, um tipo eubacterial polymerase do DNA de I, e Pfu, um tipo archaeal polymerase do DNA do DNA de B.
PCR amplifica o DNA por ciclos múltiplos de derreter o DNA na alta temperatura, de recozer primers em uma temperatura mais baixa, e então de permitir a extensão do polymerase em uma temperatura intermediária. Infelizmente, estes polymerases thermophilic do DNA mostram uma atividade muito pequena mas measurable do polymerase na temperatura de quarto durante o conjunto da experiência.
Esta atividade in-efficient do polymerase do DNA catalyze a extensão de todas as extremidades 3' recozidas. Após o amplification de PCR, o produto resultante contem uma mistura de faixas específicas e non-specific. Além disso, o 5'-3 ' atividade do exonuclease do polymerasel do DNA degrada todas as 5 ' extremidades livres de ácidos nucleic parcialmente recozidos, destruindo as carcaças do primer e do molde da reação do polymerase. Isto resulta em um rendimento mais baixo do produto desejado do pcr.
Começo Quente PCR: Publicações
Começo quente PCR com primers do calor-activatable: uma aproximação da novela para o PC melhorado... relacionou artigos
Começo quente PCR com primers do calor-activatable: uma aproximação da novela para o desempenho melhorado de PCR.
Ácidos Nucleic Res. 2008 setembro 16;
Autores: Lebedev Avoirdupois, Paul N, Yee J, VA De Timoshchuk, Shum J, Miyagi K, Kellum J, Hogrefe RI, Zon G
A reação chain do polymerase (PCR) é usada extensamente para as aplicações que requerem um nível elevado do specificity e da confiabilidade, tal como testar genetic, diagnóstico clínico, seleção do sangue, forensics e biodefense. As melhorias grandes ao desempenho de PCR foram conseguidas pelo uso das estratégias da ativação do começo quente que apontam impedir a extensão do polymerase do DNA até umas temperaturas mais estritas, mais altas são alcançadas. Nisto nós apresentamos a uma novela a aproximação da ativação do começo quente (OXP) em enlaces grupos da modificação do phosphotriester PCR onde os primers contêm um ou dois thermolabile, 4-oxo-1-pentyl (PTE) em 3'-terminal e do internucleotide 3'-penultimate. Os estudos demonstraram que a presença de um ou mais modificação de OXP PTE danificou a extensão do primer do polymerase do DNA nas temperaturas mais baixas que existem antes do amplification de PCR. Além disso, o incubation dos primers OXP-modificados em temperaturas elevated foi encontrado para produzir o primer unmodified correspondente do phosphodiester (PDE), que era então uma carcaça apropriada do polymerase do DNA. Os primers OXP-modificados foram testados em PCR convencional com deteção do endpoint, na transcrição reversa de uma etapa (RT)-PCR e em PCR real-time com verde que de SYBR eu me tinjo e do ponta de prova de Taqman(R) deteção. Quando os primers OXP-modificados foram usados como substituem para primers unmodified de PDE em PCR, a melhoria significativa foi observada no specificity e na eficiência do amplification do alvo do ácido nucleic.
PMID: 18796527 [ PubMed - como fornecido pelo publisher ]