PCR do tempo real
PCR DO TEMPO REAL: Uma introdução
Embora os métodos tradicionais de dosar o mRNA sejam razoavelmente bons como a mancha do norte e a hibridação in situ, não aproximam a facilidade e a velocidade do PCR do tempo real.
RT-PCR ou o PCR reverso do transcriptase são devido semiquantitativo precisar de carregar amostras em um gel e a insensibilidade do brometo de ethidium. Assim, o PCR do tempo real foi desenvolvido fora da necessidade de dosar diferenças na expressão do mRNA em uma maneira fácil e rápida, e devido à necessidade de usar-se das pequenas quantidades de mRNA tais como aquelas obteve por amostras de tecido pequenas, e LCM (microdissection da captação do laser) isolou pilhas.
(RT) o PCR reverso-transcriptase tempo real é diferente do outro PCR quantitativo porque dosa a quantidade inicial do molde em vez de detectar a quantidade de produto amplificado final (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
O PCR do tempo real está caracterizado pelo ponto a tempo durante a ciclagem em que a amplificação do produto do PCR do interesse é detectada primeiramente um pouco do que a quantidade do produto do PCR do interesse que está acumulado no valor-limite após o PCR que conteve um grande número ciclos. O PCR do tempo real faz este monitorando a quantidade de fluorescência emissora durante a reação do PCR, e este actua como um indicador da quantidade de amplificação do PCR que ocorre durante cada ciclo do PCR. Assim, em umas máquinas mais novas do PCR do tempo real, uma pode visualmente ver o progresso da reação no “tempo real”.
O PCR do tempo real igualmente tem um alcance dinâmico muito mais largo da dobra até 107 (comparada à dobra 1000 em RT-PCR convencional). O alcance dinâmico de um ensaio determina quanto a concentração de alvo possa variar no entanto para ser determinado ainda. Este alcance dinâmico largo igualmente conduz a uma quantificação mais exata.