PCR Real-Time
TEMPO REAL PCR : Uma Introdução
Embora os métodos tradicionais de quantitating o mRNA sejam razoavelmente bons como borrar do norte e no hybridization do situ, não aproximam a facilidade e a velocidade do tempo real PCR.
RT-PCR ou o transcriptase reverso PCR são devido semi-quantitative necessitar carregar amostras em um gel e o insensitivity do brometo de ethidium. Assim, o tempo real PCR foi desenvolvido fora da necessidade quantitate diferenças na expressão do mRNA em uma maneira fácil e rápida, e devido à necessidade usar-se de quantidades pequenas de mRNA tais como aquelas obteve por amostras pequenas do tecido, e LCM (microdissection da captação do laser) isolou pilhas.
(RT) PCR reverso-transcriptase real-time é diferente do outro PCR quantitative como quantitates a quantidade inicial do molde em vez de detectar a quantidade de produto amplificado final (Freeman, 1999; Raeymaekers, 2000).
O tempo real PCR está caracterizado pelo ponto a tempo durante dar um ciclo em que o amplification do produto de PCR do interesse é detectado primeiramente melhor que a quantidade do produto de PCR do interesse que está acumulado no end-point após PCR que conteve um grande número ciclos. O tempo real PCR faz este monitorando a quantidade de fluorescence emissora durante a reação de PCR, e este age como um indicador da quantidade de amplification de PCR que ocorre durante cada ciclo de PCR. Assim, em umas máquinas reais mais novas do tempo PCR, uma pode visualmente ver o progresso da reação "no tempo real".
O tempo real PCR tem também uma escala dinâmica muito mais larga até de 107-fold (comparado a 1000-fold em RT-PCR convencional). A escala dinâmica de um assay determina quanto a concentração do alvo possa variar no entanto para quantified ainda. Esta escala dinâmica larga resulta também em um quantitation mais exato.