Горячий Старт PCR - Цепная реакция Полимеразы
HotStart.
Горячий Старт PCR: Введение
Горячий старт PCR позволяет ингибитирование деятельности при полимеразы во время подготовки реакции PCR. Путем ограничивать деятельность при полимеразы до PCR задействуя, горячий старт PCR уменьшает неспецифичную амплификацию и увеличивает выход цели продукта PCR.
Горячий старт PCR общ выполнен путем использование включенных химически изменений, методов вощи-bar6era, и ингибитирования тац-napravlennym антителом.
PCR или цепная реакция полимеразы используют полимеразы были изолированы от термостабильных организмов such as энзим Taq, eubacterial полимераза ДНАА типа iego, и Pfu, archaeal полимеразу ДНАА ДНАА б типа.
PCR усиливает ДНАО множественными циклами плавя ДНАА на высокой температуре, обжигать праймеры на более низкой температуре, и после этого позволять выдвижение полимеразы на промежуточной температуре. Несчастливо, эти термофильные полимеразы ДНАА показывают очень малую но measurable деятельность при полимеразы на температуре комнаты во время агрегата эксперимента.
Эта неработоспособная деятельность при полимеразы ДНАА катализирует выдвижение всех обжженных концов 3'. После амплификации PCR, приводя к продукт содержит смесь специфически и неспецифичных полос. Сверх того, 5'-3 ' деятельность при exonuclease polymerasel ДНАА ухудшает все свободно 5 ' концов частично обжженных нуклеиновых кислот, разрушающ субстраты праймера и шаблона реакции полимеразы. Это приводит к в более низком выходе заданного продукта pcr.
Горячий Старт PCR: Издания
DNTPs Activatable 3'-modified жары: Синтез и применение для горячего старта PCR. Родственные Статьи
DNTPs Activatable 3'-modified жары: Синтез и применение для горячего старта PCR.
Нуклеиновые Кислоты Symp Ser (Oxf). 2008;(52):259-60
Авторы: Koukhareva Ii1, Haoqiang Ю, Yee Ж, Shum Ж, Паыль Н, Hogrefe RI, Lebedev Av
Были подготовлены несколько производных 3'-ether и 3'-ester 2'-deoxyribonucleoside 5'-triphosphates (dNTPs). Эти производные dNTP не были субстратами для полимеразы ДНАА и не поддерживали более primer выдвижение на температуре комнаты. Однако, скоро подогревать до 95 градусов ч в буфере PCR, эти dNTPs 3'-modified можно преобразовать к соответствуя unmodified естественным dNTPs которые эффективно поддерживают амплификацию PCR. Анализ продуктов PCR полученных с dNTPs 3'-modified показал значительно улучшение в представлении PCR resulting in более высокий выход amplicon и уменьшил образование продуктов-QELI (мис-zatravka и димер праймера). Среди изученных dNTPs 3'-modified, производные 3'-tetrahydrofuranyl показали самые лучшие результаты.
PMID: 18776352 [ PubMed - в процессе ]