Обратное PCR
Обратная Предпосылка PCR
Обратное PCR также вызванное ИПЧР, и сперва было описано Очюман et al. в 1988 (1).
Ограничение стандартного PCR что фланкируя зоны
5' и 3' вашей части ДНАА интереса необходимо знать.
Обратное PCR позволяет вас дирижировать PCR когда вы
только имеете информацию одной внутренне последовательности.
Цепной реакцией обратной полимеразы будет вариант PCR, и использована когда только знана одна внутренне последовательность ДНАА цели. Поэтому очень полезно в определять фланкируя последовательности ДНАА genomic вставок. Подобно к другим методам PCR, обратное PCR усиливает ДНАО цели использующ полимеразу ДНАА.
Обратное PCR использует стандартное PCR
(цепную реакцию полимеразы), тем ме менее оно имеет праймеры быть
ориентированным в обратном направлении обычной ориентации.
Шаблон для обратных праймеров будет частью ограничения была
перевязана на себе для того чтобы сформировать круг.
Обратный Метод PCR
Обратный метод PCR вклюает серию пищеварений и собственн-perewnurovok при ДНАО будучи отрезанным эндонуклеазой ограничения. Этот отрезок приводит к в знанной последовательности на любом конце неизвестных последовательностей.
Обратные Шаги PCR
1) ДНАО цели светло отрезано в более малые
части нескольких kilobases пищеварением эндонуклеазы ограничения.
2) Собственн-perewnurovka наведена под низкой
концентрацией причиняя костяк фосфата реформировать. Это дает
круговой продукт перешнуровки ДНАА.
3) ДНАО цели будет после этого ограничением усвоинным с
знанной эндонуклеазой. Это производит отрезок в пределах
знанной внутренне последовательности производя линейный продукт с
знанными терминальными последовательностями. Это можно теперь
использовать для PCR (цепной реакции полимеразы).
4) стандартное PCR дирижировано с праймерами
комплементарными к теперь знанным внутренне последовательностям.
В сводке:
Обратное PCR действует для того чтобы клонировать последовательности фланкируя знанную последовательность. Фланкируя последовательности ДНАА усвоины и после этого перевязаны для того чтобы произвести круговое ДНАО.
Праймеры PCR указывая прочь от знанных
последовательностей после этого использованы для того чтобы усилить
фланкируя последовательности.
Применения обратного PCR
Обратное PCR имеет многочисленн применения в молекулярной биологии включая амплификацию и идентификацию последовательностей фланкируя transposable элементы, и идентификацию genomic вставок.
Обратный Протокол PCR
Обратные Справки PCR
1. Ochman Ю, Gerber КАК,
Hartl Dl. Генетика. 1988 Nov;120(3):621-3.