Nested PCR Protocol Нестед ПЦР Протокол
Nested PCR Protocol Conditions Нестед ПЦР Протокол услови
For 50 ul reactions, the amounts given are per reaction. За 50 ул реакције, с обзиром на количине су по реакцијских. Make sure you make an extra reaction for every 6 reactions to have enough master mix. Постарајте се за то да направи екстра за сваку реакцију реаговања +6 имати довољно мастер микс.
External Round of PCR Спољни круг ПЦР
Master Mix Мастер Измијешати
dNTP mix (2mM each dNTP) дНТП микс (2мМ сваки дНТП) | 5 µl 5 μл |
10x PCR buffer (15mM MgCl2) 10кс ПЦР оставу (15мМ МгЦл2) | 5 µl 5 μл |
Taq polymerase (0.2U) Так полымерасе (0.2У) | 0.2 µl 0.2 μл |
dH2O дХ2О | 25.8 µl 25,8 μл |
Primer mix. Буквар мешати. Forward and Reverse primers. Проследи реверс и почетници. (5 pmoles/µl each) (5 пмолес / μл сваки) | 4 µl 4 μл |
Total Mastermix Volume: Укупно Мастермикс Количина: | 40 µl 40 μл |
DNA Template Шаблон ДНК | 10 µl 10 μл |
Internal Round of PCR Унутрашњем кругу ПЦР
Nested PCR Master Mix Нестед ПЦР мастер микс
dNTP mix (2mM each dNTP) дНТП микс (2мМ сваки дНТП) | 5 µl 5 μл |
10x PCR buffer (15mM MgCl2) 10кс ПЦР оставу (15мМ МгЦл2) | 5 µl 5 μл |
Taq polymerase (0.2U) Так полымерасе (0.2У) | 0.2 µl 0.2 μл |
dH2O дХ2О | 35.8 µl 35,8 μл |
Primer mix. Буквар мешати. Forward and Reverse primers. Проследи реверс и почетници. (5 pmoles/µl each) (5 пмолес / μл сваки) | 4 µl 4 μл |
Total Mastermix Volume: Укупно Мастермикс Количина: | 49 µl 49 μл |
DNA Template (Sample from external round PCR product) ДНК шаблона (узорка из спољног круга ПЦР производ) | 1 µl 1 μл |
PCR Machine Cycling Parameters ПЦР апарат Билијар параметрима | |
1 cycle: 1 циклус: | 94ºC/30 sec. 94 º Ц/30 сек. |
35 cycles: 35 циклуса: | 94ºC/30 sec. 94 º Ц/30 сек. |
Hold: Задржати: | 4ºC 4 º Ц |