Polymerase Chain Reaction - PCR Basics Полымерасе Цхаин реакцију - ПЦР основе
Polymerase Chain Reaction: An Alternative to cloning Полымерасе Ланчана реакција: Алтернатива клонирања
An alternative to cloning called the polymerase chain reaction PCR can be used to directly amplify rare specific DNA sequences in a complex mixture when the ends of the sequence are known. This method of amplifying rare sequences from a mixture has numerous applications in basic research, human genetics testing and forensics. Алтернатива клонирања назива полымерасе Ланчана реакција ПЦР могу се користити за директно повећати ријетких специфичну ДНК секвенце у комплексну мјешавину када крајеви су познати слијед. Ова метода појаццавањем ријетких секвенце из мешавина има бројне примене у основним истраживањима, људске генетика тестирање и форенсицс.
Genomic DNA is digested into large fragments using a restriction enzyme and then is heat-denatured into single strands. Two synthetic oligonucleotides complementary to the 3’ ends of the target DNA segment of interest are added in great excess to the denatured DNA, and the temperature is lowered to 50-60° C. Геномиц ДНК се уломци дигестед у велике користи за ограничење ензим, а затим је топлоте денатурирани у једној структури. Два синтетичка олигонуцлеотидес комплементарних на 3 'крај циљне ДНК сегмент интереса су додати у великој вишка на денатурирани ДНК, а температура се спушта на 50-60 ° Ц.
The genomic DNA remains denatured, because the complementary strands are at too low a concentration to encounter each other during the period of incubation, but the specific oligonucleotides, which are at a very high concentration, hybridize with their complementary sequences in the genomic DNA. Тхе геномиц ДНК остаје денатурирани, јер су комплементарни линија на низак фокусом на сусретно једни друге током периода инкубације, али одређене олигонуцлеотидес, који су на врло високе концентрације, укрштају са својим комплементарне секвенце у геномиц ДНК.
The hybridized oligonucleotides then serve as primers for DNA chain synthesis, which begins upon addition of a supply of deoxynucleotides and a temperature resistant DNA polymerase such as that from Thermus aquaticus (a bacterium that lives in hot springs). У хыбридизед олигонуцлеотидес тада послужити као почетници за синтезу ДНК ланац који почиње на додатак од снабдевања деоксынуцлеотидес и температура отпоран ДНК полымерасе као да је од Тхермус акуатицус (а бактерија која живи у вруцим изворима).
This enzyme, Taq polymerase can extend the primers at temperatures up to 72° C. Овај ензим, Так полымерасе може продужити почетници на температурама до 72 ° Ц.
When synthesis is complete, the whole mixture is heated up further (to 95°) to melt the newly formed DNA duplexes. Када је потпуна синтеза, цео је смеша се додатно загреване (до 95 °) за растопити се недавно формирана ДНК дуплексес.
When the temperature is lowered again, another round of synthesis takes place because excess primer is still present. Када се температура спушта се опет, други круг синтеза одвија се због вишка фитиљ је још увек присутна.
Repeated cycles of synthesis (cooling) and melting (heating) quickly amplify the sequence of interest. Поновљени циклуси синтезе (хлађење) и таљење (грејање) брзо проширити на слијед интереса.
At each round, the number of copies of the sequences between the primer sites is doubled; therefore, the desired sequence increases exponentially. На сваки круг, број копија у секвенци између првог интерфејса је удвостручен, дакле, жељени слијед повећава експоненцијално.