PCR Za kloniranje
Za kloniranje PCR Proizvod
Da te oskudica za klon jedan fragment nad DNA- u jedan koji se odnosi na plazmu inače sastaviti, pojedinac nad određeni član najlakši putevi raditi današji 3. lice od TO BE u prezentu pomoću PCR. Da te imati određeni član DNA- fragment inače gen već unutra jedan koji se odnosi na plazmu, pa određeni član ograničenje položaj bočni određeni član fragment biti kompatibilan s određeni član nov koji se odnosi na plazmu te oskudica za klon to u, ograničenje enzim varenje obično utvrde izvor.
Unatoč tome, da te oskudica za inženjer nov ograničenje položaj umjesto određeni član fragment, sastaviti izbacivanje nad određeni član fragment, inače mutirati položaj u kući određeni član DNA-, PCR inače polimer lanac otpor nad DNA- fragment 3. lice od TO BE u prezentu pojedinac nad određeni član najlakši pa najbolji putevi za klon tvoj fragment pomoću PCR.
Crtanje Example umjesto PCR Za kloniranje
Example umjesto PCR za kloniranje biti obično dulji zbog određeni član potreba dodati ograničenje položaj.
Ograničenje položaj biti obično 6 krvni pritisak duljine. Da te nisu lijeganje podrazred određeni član PCR proizvod, te potreba dodati nucleotides 5' nad određeni član ograničenje položaj
Današji dopustiti određeni član ograničenje enzim za vezati za pa rez određeni član ograničenje položaj da bude briny efikasan.
Razmaknica Ograničenje položaj Example Sled ( dizajniran kod example plan)
3 krvni pritisak -6bp—15-22 krvni pritisak
PCR Subcloning
(podrazred način za klon određeni član PCR proizvod u jedan vektor pre nego te umetnuti to u tvoj vektor nad zanimanje. Prednost nad današji uključiti određeni član fakt taj te nikada morati PCR tvoj umetnuti opet, te volja uvijek imati pik na određeni član hladnjak, pa te moći odrast koliko god te oskudica pomoću bakterija)
Iz naš iskustvo, rezanje PCR proizvod 3. lice od TO BE u prezentu obično a kamoli efikasan nego rezanje fragmenti van vektor. Stoga, rezanje PCR proizvod pa za kloniranje njima u tvoj vektor ravno ne može biti taj efikasan pa te možda će morati nesreća događaj današji.
Taj 3. lice od TO BE u prezentu put subcloning u jedan subcloning vektor 3. lice od TO BE u prezentu obično najbolji.
TOPO Vektor
TOPO vektor biti velik umjesto subcloning, mada oni moći postojati skup. Oni volja spasiti te vrijeme u budućnosti, pa napraviti za kloniranje PCR proizvod lakši pa briny efikasan.
Određeni član razlog umjesto današji 3. lice od TO BE u prezentu taj te moći lako provariti DNA- unutra jedan koji se odnosi na plazmu. To 3. lice od TO BE u prezentu briny efikasan umjesto određeni član ograničenje enzim ace to moći lako vezati za pa provariti tvoj komad.
Zapreka biti taj te morati imati efikasan pa optimiziran PCR okolnostima. Određeni član prisutnost nad mnogobrojan glazbenik unutra tvoj PCR volja učiniti težak ako ne nemoguć za klon tvoj PCR proizvod nad zanimanje.
Te moći obično podrazred tvoj PCR proizvod u kući okolo 2 dan. Vezanje uzeti jedini 5 minut pa te moći tanjur tvoj bakterijski kolonijalni dan nad određeni član vezanje. Jednom te motika kolonijalni sutradan pa rasti njima unutra mnoižna od MEDIUM, te ne jedini povećati tvoj umetnuti, te isto zatim imati jedan bakterijski kolonija nad tvoj subcloned umetnuti šta te moći zamrznuti s glicerol u određeni član tečnost dušik godinama.
Današji stvarno pomoć našto te potreba da izvrši drugi sastaviti s tvoj umetnuti!