Conditions and Factors Affecting PCR Villkor och faktorer som påverkar PCR
Factors Affecting PCR: Faktorer som påverkar PCR:
PCR Reaction Volume PCR-reaktionen Volym
If you are increasing the PCR reaction volume proportionally to a PCR reaction that is optimized or works well, in general you will increase the amount of product with increasing volume. Om du ökar PCR-reaktionen volym proportionellt till ett PCR-reaktion som är optimerade och fungerar bra i allmänhet kommer du att öka den mängd produkter med ökande volym. Exceptions to this include older mineral oil PCR machines and PCR thermocyclers without a heated-lid. Undantag från denna omfatta äldre mineralolja PCR-maskiner och PCR thermocyclers utan en uppvärmd-lock. In these cases, increasing the PCR reaction volume will negatively affect the PCR product and efficiency of the reaction. I dessa fall ökar PCR-reaktionen volym kommer att negativt påverka PCR-produkten och effektivitet i reaktion.
PCR Primer Design PCR Primer Design
Primer are usually chosen to be between 18-25 nucleotides in length. Primer är i regel valt att vara mellan 18-25 nukleotider i längden. Longer primers also work 30-40 nucleotides or bp during pcr Längre grundfärg också arbeta 30-40 nukleotider eller baspunkter under PCR
A GC clamp at the 5' ends of the primers helps. En GC klämma på 5 "ändarna av de första hjälper.
One can thus design primers with 1 or 2 nucleotides GC at the start and ends of the primers if possible Man kan alltså design grundfärg med 1 eller 2 nukleotider GC i början och slutar med den första om möjligt