殖民地PCR
什么是殖民地PCR?
殖民地的 定义PCR 是:
殖民地PCR 细菌(E.Coli) 或酵母掩护克隆为正确结扎术或质粒产品。细菌选择的殖民地或酵母被采摘以一个不育的牙签或吸移管要诀从成长(agarose) 板材。这被插入入PCR 大师混合或然后前被插入入被真空加热的水。PCR 然后被举办确定如果殖民地包含DNA 片段或质粒利益。
细菌E.Coli 殖民地PCR 协议
殖民地PCR 快的Prep 方法
步骤1:
采摘细菌殖民地以一个被真空加热的牙签或吸移管要诀和打旋它入25 μ升TE 被真空加热的dH2.O 在一支被真空加热的microfuge 管。不要去除整个殖民地, 和标记您preferrably 采摘数字板材的区域(和microfuge 管的) 底部。
步骤2:
加热混合在煮沸的热水锅或热的(90-100C) 热化块2 分钟
步骤3:
转动样品2 分钟高速在离心机。
步骤4:
转移 μ上层清液的20 升入一支新microfuge 管。
步骤5:
采取1-2 μ升上层清液作为模板在一25 μ升PCR 标准PCR 反应。
酵母殖民地PCR 协议
采取增长在板材新鲜从37C 孵养器的酵母细胞(新鲜地增长的酵母是更好)
采取一个被真空加热的牙签或吸移管要诀和接触一点酵母殖民地。不要刮全殖民地。暂停它入一标准PCR mastermix 。
PCR 循环的情况:
第一弈质的步: 95 .C, 5 分钟
弈质步: 95 .C, 30 秒
焖火步: 50-55 .C, 30 秒
引伸步: 72 .C, 1min/kb
重覆 步s 2-4: 34 次
最后的引伸: 72 .C, 3 分钟
装载整个PCR 反应1% agarose 胶凝体。
殖民地PCR - Pubmed 出版研究
原封细菌(殖民地直接PCR PCR) 。 相关文章
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Curr Protoc Microbiol 。2008 年May;Appendix 3:Appendix 3D
作者: Woodman 我
这个协议描述一个高效率的方法为筛选原封细菌为渴望的DNA 序列出现使用聚合酶链式反应(PCR) 。这个方法共同地指殖民地PCR 。
PMID: 18770531 [ PubMed - 在过程中]