倒数PCR
倒数PCR背景
倒数PCR也叫IPCR和等首先是由Ochman描述的1988年(1)。
标准PCR的限制是必须知道您的脱氧核糖核酸片段的5个'和3个'侧的地区利益。 当您只有一个内部顺序的信息时，倒数PCR允许您执行PCR。
当仅目标脱氧核糖核酸的一个内部顺序知道时，倒数聚合酶链反应是PCR变形和使用。 因此是非常有用的在识别genomic插入侧的脱氧核糖核酸顺序。 使用脱氧核糖核酸聚合酶，类似其他PCR方法，倒数PCR放大目标脱氧核糖核酸。
倒数PCR使用标准PCR (聚合酶链反应)，然而它安排初级读本被安置在通常取向的反向。 反向初级读本的模板是被绑扎在本身形成圈子的限制片段。
倒数PCR方法
倒数PCR方法包括与限制核酸内切酶被剪切的脱氧核糖核酸的一系列的消化和自结扎术。 此剪切导致一个已知的顺序在未知的顺序的任一个结尾。
倒数PCR步骤
1)目标脱氧核糖核酸轻地被剪切成几kilobases的更小的片段由限制核酸内切酶消化。
2)自结扎术导致在造成磷酸盐中坚的低浓度之下改革。 这产生一个圆的脱氧核糖核酸结扎术产品。
3)目标脱氧核糖核酸是然后限制消化与已知的核酸内切酶。 这生成在生成与已知的最终顺序的已知的内部顺序之内的剪切一个线性产品。 这可能为PCR (聚合酶链反应)现在使用。
4)标准PCR执行与初级读本补充对现在已知的内部顺序。
总之：
倒数PCR发挥作用克隆侧一个已知的顺序的顺序。 侧的脱氧核糖核酸顺序被消化然后被绑扎生成圆的脱氧核糖核酸。
指向远离已知的顺序的PCR初级读本然后被使用放大侧的顺序。
倒数PCR的应用
倒数PCR有许多应用在分子生物学包括侧有换位可能的要素的顺序的放大作用和确定和genomic插入的确定。
倒数PCR协议
倒数PCR参考
1. Ochman H， Gerber， Hartl DL。 遗传学。 11月1988日; 120 (3) ：621-3.