相反PCR
相反PCR 背景
相反PCR 并且告诉IPCR, 和由Ochman 等第一次描述了1988 年(1) 。
标准PCR 的局限是, 5' 和3' 您的DNA 片段的侧的地区利益必须为人所知。相反PCR 允许您举办PCR 当您只有一个内部序列的信息。
相反聚合酶链式反应是PCR 变形, 和被使用当只目标DNA 的一个内部序列为人所知。它是因此非常有用的在辨认genomic 插入物侧的DNA 序列。相似与其它PCR 方法, 相反PCR 放大目标DNA 使用DNA 聚合酶。
相反PCR 使用标准PCR (聚合酶链式反应), 然而它安排底漆被安置在通常取向的反向。模板为反向底漆是被绑扎在本身形成圈子的制约片段。
相反PCR 方法
相反PCR 方法包括一系列的消化和自已结扎术与DNA 由制约核酸内切酶被切开。这裁减导致一个已知的序列在或者未知的序列的结尾。
相反PCR 步
1) 目标DNA 轻微被切开成几kilobases 的更小的片段由制约核酸内切酶消化。
2) 自已结扎术导致在低集中之下导致磷酸盐中坚改革。这给一个圆DNA 结扎术产品。
3) 目标DNA 是然后制约被消化与知道的核酸内切酶。这引起裁减在已知的内部序列之内引起一个线性产品以已知的终端序列。这可能现在被使用为PCR (聚合酶链式反应) 。
4) 标准PCR 被举办与底漆补全对现在已知的内部序列。
总之:
相反PCR 起作用克隆序列侧一个已知的序列。侧的DNA 序列被消化和然后被绑扎引起圆DNA 。
PCR 底漆指向从已知的序列然后被使用放大侧的序列。
相反PCR 的应用
相反PCR 有许多应用在分子生物学包括序列的放大作用和证明侧transposable 元素, 和genomic 插入物的证明。
相反PCR 协议
相反PCR 参考
1 。Ochman H, Gerber 和, Hartl DL 。 遗传学。 1988 Nov;120(3):621-3 。